高效液相色与谱.ppt

高效液相色谱法 一、高效液相色谱法的特点 二、流程及主要部件 三、固定相和流动相 四、主要分离类型 五、影响分离的因素 （一）分配色谱 （二）吸附色谱 （三）离子交换色谱法 （四）排阻色谱法 分配色谱 分配色谱–分离原理 固定相的化学构造 非键合相表面 键合相表面 ODC C18 C8 C1 Phenyl -NH2 -CN 吸附色谱法 分离原理 排阻色谱法(凝胶色谱法) 大分子不能进入多孔中，不被保留，随 Vm流出 中分子部分进入多孔中，一般保留 小分子完全进入多孔中，长时间保留。 高分子化合物分子量及分子量分布 DNA碎片不同碱基支链分离。 流动液贮存提供脱气 输液泵 进样系统 分离系统 检测系统 控制与记录系统 （1）真空泵抽滤系统 （2）低溶性惰性气体导入替换 （3）超声脱气 （4）在线脱气 活塞泵 注射泵 气动泵 进样系统 不使整个压力变化的情况下将样品注入色谱柱，通常使用所谓六通阀 单波长UV检测器，光源用Hg灯，加滤光片可以到254，280，313，334，365等。生化中用到很多。 多波长 光度计类似，光栅或棱镜分光 标准样品法 谱库 HPLC-FTIR HPLC-MS 高效液相色谱应用实例 对有机酸具有高选择性和高灵敏度