转化BL暮完分子生物学实验.pptVIP

* 大肠杆菌BL21感受态细胞制备及重组DNA的转化 实 验 八 背景理论知识 Section 1 8.1.1 实 验 目 的 掌握制备和保存大肠杆菌感受态细胞的方法 掌握质粒转化的方法技术 受体菌: (一般不带特异的筛选标记） E.Coli BL21（DE3）(用T7启动子进行原核表达) DE3是整合在细菌基因组上的一种携带T7 RNA聚合酶基因和lacI基因的λ噬菌体，其基因型为：lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5 重组质粒: （Kanr） pET28a-eGFP 8.1.2 受体菌与重组质粒 8.1.3质粒DNA的转化 + 质粒DNA 420C热击 370C复苏 Kan+筛选 感受态细胞 Ca2+能与加入的DNA分子结合，形成抗DNA酶(DNase)的羟基-磷酸钙复合物，并黏附在细菌细胞膜的外表面上。当42℃热刺激短暂处理细菌细胞时，细胞膜的液晶结构发生剧烈扰动，并随之出现许多间隙，为DNA分子提供了进入细胞的通道。 8.1.4 影响转化效率的因素 细菌的生长状态：大肠杆菌在对数中期易产生感受态 OD值：0.3－0.5 (5X107个/ml) 试剂的质量： 化合物及无机离子：Rb+、Mn+、二甲亚砜等 质粒：大小、构型 外源DNA（质粒）与细胞的比例： 器皿的洁净度 污染—尽量所有打开器皿盖的操作都在超净台中