大肠杆菌杂交系统及应用演讲人冯燕丽.PPTVIP

原理 依赖转录激活过程； 报告基因的表达水平与bait（已知蛋白）与 target （已知蛋白）蛋白间作用强度呈正相关性； 双杂交系统：筛选已知相互作用的蛋白 或与特定蛋白作用的未知蛋白 生化方法：需要纯化蛋白或抗体 方法 材料：bait、target载体 报告细胞 其他必要因素 要求：bait载体，pBT , 3.1kb,编码全 长细菌噬菌体cl蛋白 target载体,pTRG, 4.3kb,控制 RNA 多聚酶? 亚基和连接区的转录 报告细胞,XL1-Blue MRF’,无任何限制系统,与cDNA文库建立方法兼容 已知蛋白(bait) ? 全长细菌噬菌体蛋白?cI ?cI（N-端DNA结合区和C-端二硫基） 结合位置：在?操纵子序列的上游 目标蛋白（target）?RNA 多聚酶? 亚基N-端 报告细胞中进行: bait ? target 作用后启动两个报告基因ampr、lacZ 具体: bait与 target作用时，其恢复和稳