矿山型东南景天cDNA表达文库构建与耐镉基因筛选.pdfVIP

林业科学研究2012，25(3)：332～338 文章编号：1001-149812012)03-0332-07 矿山型东南景天cDNA表达文库构建与耐镉基因筛选 刘明英k2，乔桂荣1’2，蒋晶1’2，邱文敏L2，卓仁英1’2。 (1．中国林业科学研究院亚热带林业研究所，浙江富阳311400；2．林木遗传育种国家重点实验室，北京100091) 摘要：以筛选出的镉超积累矿山型东南景天为材料，经镉胁迫后提取总RNA，纯化mRNA，利用改良SMART技术合 成了全长eDNA，回收500 bp以上eDNA大片段克隆到改造过的大肠杆菌／酵母穿梭载体pYES2．0G中，建成东南景 000 天镉全长cDNA文库，对随机挑取的阳性克隆进行PCR鉴定，插入片断大小在1 bp左右，说明所构建的文库达 到了用于目的基因分离筛选和表达的建库要求，为将来筛选克隆与东南景天抗重金属相关基因奠定了基础。 关键词：东南景天；eDNA文库；耐锅；酿酒酵母 中图分类号：S718．46 文献标识码：A ofStressInducedFull eDNA of Construction Sedum Length Library IsolationofGenesRelatedtoCd-tolerance alfre诚and L／U Miag-yin91’，QlaOCad．ton91”，JIANGJin91”，QIUWen—rainl”，ZHUORen-yin91。 Forestry，ChineseAcademy311400．zllejiaIIg，Chins； (1．Re∞_,amhInstitute0fSubtropical ofFomstry，Fuyang 0fTree and 2．State Genetics KeyLalmramfy Breeding，Beijing100091，China) cadmium cDNA fromtheSedum wasconstructedim- Abstract：A Library 8仃e鹪induced矗】ll-length alfredii byusing RNAwere SMARTcDNA construction extractedfrom undercadmium proved 1ibrary protoc01．Total S．alfredii stress．After thefirst—strandcDNAlimitedamountoftotalRNA．thedouble—strandcDNAw8san]． synthesizing using witll cDNA to PCRmethod．The waslinkedversatilevector pliiiedlong-distance full—lengthfragment pYES2．0G， thenthelinked WaStransferredinto INVS