抗菌肽牛乳铁多肽素(LfcinB)在毕赤酵母中的表达及活性鉴定.PDFVIP

　2007年 34 (2) 微 生 物 学 通 报 ·265 · 抗菌肽牛乳铁多肽素 ( L fc inB)在毕赤酵母中的表达及活性鉴定 易俊波 　黄德新 　李凌云 　林 　枫 (深圳国家生化工程技术开发中心　深圳 　518057) 摘要 : 利用巴斯德毕赤酵母 ( P ich ia p as tors) 系统表达抗菌肽 ———牛乳铁多肽素 ( bovine lactoferricin, 简称 L f cinB ) , 获得的分泌型表达产物具有较强的抗菌活性 。首先将人工合成的 L fcinB 基因片段克隆到巴斯德毕赤酵母 分泌型表达载体 p P IC9K 中 , 获得的重组质粒 p P IC9KL fcinB 通过限制性内切酶 Sal Ⅰ酶切线性化 , 经电穿孔法转 化入毕赤酵母细胞 SMD 1168 内。G4 18抗性筛选 , 得到高拷贝转化子 , 经 PCR 检测 L fcinB 基因与毕赤酵母染色 体稳定整合 。阳性克隆经甲醇诱导表达 L fcinB 。结果表明 , 抗菌肽牛乳铁多肽素基因已经整合到酵母细胞基因组 中并获得表达 , 表达产物具有较强的杀菌作用 。 关键词 : 牛乳铁多肽素 (L fcinB ) , 基因 , 表达载体 , 毕赤酵母表达系统 中图分类号 : Q782 , Q784 , Q786　　文献标识码 : A 　　文章编号 : (2007) 02 026505 Expression and Iden tif ica tion of L fc inB Gene in P ich ia pa stor is Y I JunBo　HUAN G D eX in　L I L ingYun　L IN Feng (N a tiona l E ng ineering Cen ter f or B iotechnology, S henzhen 518057) Ab stract: In p resent study, bovine L actoferricin was first secretly exp ressed in P ich ia p astors yeast exp ression system The synthesized L f cinB gene fragm ent was cloned into exp ression vector p P IC9K, and then ob tained recomb inant p lasm id, designated as p P IC9KL fcinB , was linearized and tran sform ed into P ich ia p astors strain s SMD 1168 by electroporationThe tran sform antswere screened w ith Geneticin and mu lti p lycop y colon ies were harvested, in wh ich L fcinB gene was verified to in serted into yeast chromosom e stab lyThe po sitive recomb inant P ich ia stra ins were induced w ith m ethanol to exp ressL fcinB in cu ltu re sup ernatant Its exp ressive p roducts has h igh activity of k illing bacteri aW e conc