无菌检查法方法验证及操作要点.pptVIP

2005版药典无菌检查法方法验证及操作要点 饶春意 1 前言 1.1 定义 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药 品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方 法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明 了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 1.2 实验环境条件要求 无菌检查应在环境洁净度10 000级下的 局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔 离系统中进行，其全过程必须严格遵守无 菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、 工作台面及环境应定期按《医药工业洁净 室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方 法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔 离系统按相关的要求进行验证，其内部环 境的洁净度须符合无菌检查的要求。 2. 培养基 2.1 培养基的灭菌 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。 2.2 培养基的保存 制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的 环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三 周内使用；若保存于密闭容器中一般可在一年内 使用。 2.3 培养温度 硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养。改良马丁培养基置23～28℃培养。 2.4 培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。 2.4.1无菌性检查 每批培养基随机取不少于5支(瓶)，培养14天，应无菌生长。 2.4.2 灵敏度检查 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌、生孢梭菌接种至硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养3天； 白色念珠菌、黑曲霉接种至改良马丁培养基中23～28℃培养5天。 3. 稀释液、冲洗液及其制备方法 0.1％蛋白胨水溶液 pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液 4. 方法验证试验 目的: 1)证明所采用的方法适合于该药品的无 菌检查 2) 确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计。 3) 确保在实际检验条件下，该供试品的无菌检查法的准确性、有效性和重现性。 验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。 4.1 菌种 1）金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26 003] 2）铜绿假单胞菌 (Pseudomonasaerugznosa)[CMCC(B)10 104] 3）枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)[CMCC(B)63 501] 4）生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)[CMCC(B)64 941] 5）白色念珠菌 (Candidaalbicans)[CMCC(F)98 001] 6）黑曲霉 (Aspergillusniger)[CMCC(F)98 003] 4.2 菌液制备 制备的菌液，一般当日使用。 金黄色葡萄球菌（铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌) 营养肉汤（或营养琼脂培养基） 生孢梭菌 硫乙醇酸盐流体培养基 30～35℃培养18～24小时； 白色念珠菌 改良马丁培养基（或改良 马丁琼脂培养基） 23～28℃培养24～48小时 上述培养物 用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于l00cfu(菌落形成单位)的菌悬液。 黑曲霉 改良马丁琼脂斜面培养基上， 23～28℃培养5～7天， 加入3～5ml 0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗 脱 吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌 棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌 试管内 用0.9％无菌氯化钠溶液制成每lml含孢 子数小于l00cfu的孢子悬液。 4.4 直接接种法 取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接人小于l00cfu的