双分子荧光互补技术和其在蛋白质相互作用研究中的应用.pdfVIP

in and 生物化学与生物物理进展Progress BiochemistryBiophysics，2006，33(6)：589-595 Ⅵr、)nⅣ．pibb．ac．cn PIIII! 双分子荧光互补技术及其 在蛋白质相互作用研究中的应用 =l= 严晶霍克克” (复旦大学生命科学学院，遗传工程国家重点实验室，上海200433) fluorescence 摘要双分子荧光互补(bimolecular 观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术．该技术巧妙地将荧光蛋白分子的两个互补片段分别与目标 BiFC)，不仅能同时检测到多种蛋白质复合体的形成，还能够对不同蛋白质问产生相互作用的强弱进行比较．目前，该技术已 用于转录因子，G蛋白阶亚基的二聚体形式，不同蛋白质问产生相互作用强弱的比较以及蛋白质泛素化等方面的研究工 作上． 关键词双分子荧光互补(BiFC)，蛋白质相互作用，亚细胞定位 学科分类号Q6 活细胞中蛋白质之间的相互作用在何时何地如 达．受到激发时，不需要任何辅助因子，就能在活 何发生，一直是生物学家迫切想了解的问题之一． fluorescence 而双分子荧光互补(bimolecular GFP基因．随后，GFP作为一种研究基因表达和蛋 白质定位的活体可遗传标记，在各种类型细胞的研 complementation，BiFC)分析技术，为我们在荧光 显微镜下直接观察蛋白质的相互作用提供了一种直 究中得到了广泛的应用． 接的途径【”． GFP的一些定点突变能明显地改变其波长性 fluorescent 该方法利用绿色荧光蛋白(green 质．产生的突变体。具有产生多色光的特性，如： GFP66位的酪氨酸突变为色氨酸后成为青色荧光蛋 protein，GFP)及其突变体的特性作为报告基因， 将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片 fluorescence 白(cyan 段，再分别与目标蛋白连接．如果两个目标蛋白因 为有相互作用而靠近，就使得荧光蛋白的两个分子 fluorescence 片段在空间上相互靠近，重新形成活性的荧光基团 丙氨酸后成蓝色荧光蛋白(blue 而发出荧光．在荧光显微镜下，就能直接观察到两 目标蛋白是否具有相互作用，并且在最接近活细胞 生理状态的条件下观察到其相互作用发生的时间、 相互作用，利用的就是ⅥP作标记，在荧光显微 位置、强弱、所形成蛋白质复合体的稳定性，以及 镜下用525nlTl波长直接检测黄色荧光． 细胞信号分子对其相互作用的影响等，这些信息对 GFP家族还有一重要性质——循环排列 研究蛋白质相互作用有一定意义． 1 BiFC原理 1A1 1)，十五重大攻关项目中 术研究发展计划(863)项目(2002BA71 1．1荧光蛋白的结构与特性 国人肝脏蛋白组计划(CNHLPP)但004BA711A19)和上海市科技创新 团队项目资助． 绿色荧光蛋白(GFP)