复方白芍保肝颗粒标志性成分检测方法的研究-答辩稿.pptVIP

* 复方白芍保肝颗粒标志性成分检测方法研究 目 录 研究的目的及意义 主要研究内容 实验结论 致 谢 一、研究目的及意义 本论文是复方白芍保肝颗粒研究的子项目，通过紫外分光光度法对原药材（白芍、葛根、五味子、丹参和甘草）及成品标志性成分进行含量测定。 紫外分光光度法对测定原药材及成品标志性成分含量具有简便、快速、准确、选择性好、分析成本低、操作简便、快速等优点，适用浓度范围广。通过对复方白芍保肝颗粒标志性成分检测方法的研究为制定企业标准、工艺选择、工业生产奠定了理论基础。 二、主要研究内容 原药材的定性、定量分析 成品中功效成分的提取 成品中功效成分定性、定量分析 方法学考察 1. 原药材的定性分析 1）白 芍 0.5g粉末 乙醇10mL 振摇5min 另取芍药苷对照品，用乙醇配制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。 薄层试验 喷5%香草醛 三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2） 图1 白芍薄层 白芍薄层分析，结果见图1。 葛 根 0.8g粉末 甲醇10mL，放置2h 滤过，滤液蒸干，0.5mL甲醇回溶 另取取葛根素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。 薄层试验 三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5： 0.25） 紫外光灯（365nm）下检视 葛根薄层分析，结果见图2。 图2 葛根薄层 五味子 1g粉末 三氯甲烷20mL 加热回流30min 滤过，滤液蒸干，1mL三氯甲烷回溶 另取五味子醇甲对照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。 薄层试验 紫外光灯（254nm）下检视 石油醚-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1） 五味子薄层分析，结果见图3。 图3 五味子薄层 丹 参 丹参酮ⅡA 1g粉末 乙醚5mL，振摇 放置1h 滤过，滤液蒸干，1mL乙酸乙酯回溶 另取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。 薄层试验 石油醚-乙酸乙酯（4:1） 相同位置显色 丹参酮ⅡA薄层分析，结果见图4。 图4 丹参酮ⅡA薄层 丹 参 丹酚酸B 0.2g粉末 加热回流1h 75%甲醇25mL 滤过，滤液浓缩至1mL 另取丹酚酸B对照品，加75%甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。 薄层试验 紫外光灯（254nm）下检视 甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2：3：4：0.5：2） 丹酚酸B薄层分析，结果见图5。 图5 丹酚酸B薄层 甘 草 1g粉末 乙醚40mL 滤过，弃去醚液 加热回流1h 甲醇30mL 加热回流1h 滤过，滤液蒸干 残渣加水40mL 正丁醇提取3次 合并正丁醇液 每次20mL 水洗涤3次 正丁醇蒸干，加5mL甲醇回溶 弃去水液 另取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。 薄层试验 喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰 乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2） 甘草薄层试验，结果见图6。 图6 甘草薄层 2. 原药材的定量分析 1).芍药苷的提取 圆底烧瓶中加5g粉末 85%乙醇100mL 过滤，减压浓缩 加热回流2h 用25mL石油醚去脂 水饱和正丁醇萃取，浓缩 留下水相 用85%乙醇做空白，将配制好的对照品溶液于紫外分光光度计于230nm的紫外光处测定吸收值，并以浓度为横坐标、吸收值为纵坐标绘制标准曲线，见图7。样品的吸光度为0.2494。 如图7，得到芍药苷的标准曲线的回归方程为Y=0.0598X+0.0015 （R2=0.9998），根据样品的吸光度得到芍药苷的含量为3.16%1.6%，符合中华人民共和国药典含量的规定。 图7 苯甲酸对照品的标准曲线 用30%乙醇做空白，将配制好的对照品溶液于紫外分光光度计于250nm的紫外光处测定吸收值，并以浓度为横坐标、吸收值为纵坐标绘制标准曲线，见图8。样品的吸光度为1.5918。 2）.葛根素提取 如图8，得到葛根素的标准曲线的回归方程为Y=0.2138X+0.034（R2=0.9992），根据样品的吸光度得到葛根素的含量为3.97%2.4%，符合中华人民共和国药典含量的规定。 图8 葛根素对照品的标准曲线 提取3次/1.5h，浓缩，定容25mL容量瓶 用甲醇做空白，将配制好的对照品溶液于紫外分光光度计于254nm的紫外光处测定吸收值，并以浓度为横坐标、吸收值为纵坐标绘制标准曲线，图9。样品的吸光度为1.5317。 2g粉末置于250mL索氏提取器中 氯仿-甲醇(1:3)60mL 3）.五味子醇甲提取 图9 五味子醇甲对照品的标准曲线