2017_2018学年高中生物第六章蛋白质和DNA技术第一节蛋白质的提取和分离学案中图版选修.docVIP

第一节　蛋白质的提取和分离 1．了解提取生物大分子的基本思路和方法。 2．尝试蛋白质的提取。 一、蛋白质分离提纯技术 将生物体内的蛋白质提取出来并加以分离，就可以得到高纯度的甚至是单一种类的蛋白质。 1．蛋白质分离提纯技术 包括离心技术、层析技术和电泳技术等。其中，电泳技术最为快捷灵敏、简便易行。 2．电泳原理 蛋白质含有游离的氨基和羧基，是两性电解质，在一定pH条件下带有电荷。作为带电粒子，蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动，这就是电泳现象。蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快；电荷数相同时，相对分子质量越小，则移动越快。 3．不同蛋白质的混合溶液，在经过同一个电场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹。每一种带纹可能就是一种蛋白质。将这些带纹一个一个地剪下来，分别予以洗脱，然后对洗脱液中的蛋白质做进一步的分离。如果待测洗脱液不能再分离，则这个带纹中很可能含有一种单纯蛋白质。如果待测洗脱液还能再分离，则这个带纹中含有多种蛋白质，需要作进一步分离，直至提纯。 二、血清蛋白的提取和分离 1．新鲜血液在体外凝固后，会析出清亮的淡黄色液体——血清。血清中含有丙种球蛋白、凝集素等多种蛋白质。 2．过程 （1）点样：取新制血清与蔗糖溶液及溴酚蓝指示剂等体积混匀后，小心加到电泳样品槽的胶面上。 （2）电泳。 （3）染色：取出凝胶，放入考马斯亮蓝R250染色液中。染色与固定同时进行，