乳酸菌的培养与分离.ppt

乳酸菌的培养与分离 →保加利亚乳杆菌 指导老师：钟剑霞 组长 ：王小英 组员： 王小英、郑春玲 阙小琴、柳洁 实验目的 1、熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能，掌握油镜的原理和使用方法 2、学习微生物涂片、染色的基本技术，了解并掌握革兰氏染色的原理 3、观察认识保加利亚乳杆菌的形态，掌握用显微镜测微尺测量保加利亚乳杆菌的 大小的测定的方法。 4、通过对培养基的配制，了解配制培养基的一般步骤和方法，掌握微生物实验常 用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。 5、了解各种灭菌的基本原理和应用范围，掌握实验室中常用的立式高压蒸汽灭菌 锅、干热灭菌的操作技术。 6、了解稀释平板计数的原理，熟练掌握混合平板培养法，掌握乳酸菌菌落总数测 定的方法。 7、熟练和掌握微生物的无菌操作接种技术。 8、掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。 9、初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握保加利亚乳杆菌鉴定中常用生理 生化反应的原理和方法。 10、了解并掌握微生物菌种保藏的常用方法。 实验原理 实验器材 样品：含乳酸菌的酸奶 培养基：营养琼脂蛋白培养基 材料：脱脂奶粉 CaCO3 吐温80 蒸馏水 草酸铵结晶紫溶液 95%乙醇 卢戈氏碘液 番红溶液 NaCl NaOH溶液 蛋白胨 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖 仪器用品：培养皿15个 试管10个 硅胶塞10个 500ml烧杯1个 玻片10个 250ml三角瓶3个 小导管10个 量筒1个 小胶帽4个 接种工具“2（接种环）+1（接种棒）” 擦镜纸100张 双层瓶1个 胶头滴管2个 废液缸4个 牛皮纸10张 细绳、棉花 洗气瓶 托盘天平 牛角匙 玻棒、酒精灯 显微镜测微尺 恒温培养箱 移液管1ml 10个 移液管10ml 2个 高压蒸汽灭菌锅 吸水纸 精密pH试纸 显微镜 电子天平 超净工作台 记号笔 报纸 乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。 本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+和G-菌。通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌； 乳酸菌应为乳杆菌和乳球菌的混合体。酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售的酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。 细菌及其它一些微生物的大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计； 培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组份的营养物质调制而成的营养基质； 灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包括芽孢； 自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。 用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。 实验内容 稀释混合平板分离乳酸菌 一、实验材料准备 清洗玻璃器皿：培养皿、试管、移液管、烧杯、玻片、三角瓶、量筒等 量取蒸馏水：用移液管分别量取9ml的蒸馏水于4支试管中，塞上硅胶塞； 同样量取90ml的蒸馏水于一个三角瓶中，塞上棉花塞。