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第4章 沉淀法 知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金属离子沉淀法。 重点：上述几种沉淀方法的概念、原理及其适用范围；盐析法的影响因素对沉淀效果的影响，并能根据实际情况予以灵活应用和选择。 难点：常用沉淀方法的灵活运用。 1. 沉淀法概述 沉淀定义 沉淀特点 应用范围 沉淀分类 沉淀法分类 盐析法 有机溶剂沉淀法 选择性变性沉淀法 等电点沉淀法 离子型聚合物沉淀法 聚电解质沉淀法 高价金属离子沉淀法 蛋白质的理化性质的回顾 活性蛋白 非活性蛋白 理化性质 溶解度 提取方法 2. 盐析沉淀 盐析沉淀步骤 加沉淀剂方式 陈化条件 脱盐处理 盐析机理示意图 盐析的机理 ①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降； ②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降； ③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低。 盐析沉淀基础 Cohn方程式logS=β-KsI Ks盐析 β盐析 二次盐析 图1 碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图 不同蛋白质的溶解度曲线 蛋白质的盐析分布曲线 溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b) 盐析影响因素 对β影响 对Ks影响 盐种类 盐浓度 温度 pH值 无机盐种类