唾液淀粉酶的影响因素.ppt

背景 酶具有催化效率高，专一性强，作用条件温和等特点，目前在科研、食品加工、饲料生产、医疗等方面具有广泛的应用。唾液淀粉酶存在于唾液中，是一种有催化活性的蛋白质，可将淀粉水解为麦芽糖。影响其活性的因素有很多，除了本身结构特点和结构功能特点影响之外，还主要包括PH值、温度、重金属离子、抑制剂、激活剂及酶浓度等。 实验背景 实验原理 麦芽糖、葡萄糖遇碘不显色 淀粉水解产物与碘液反应生成不同的颜色反应 淀粉+碘生成蓝色 糊精+碘根据水解程度，由紫色到橙色，水解越彻底， 颜色越浅，直到生成无色糊精（碘不显色） 实验材料 实验仪器：控温水浴锅、制冰机、电磁灶、不锈钢锅 白瓷板、试管、滴管、移液管（1-2ml） 实验试剂：蒸馏水、1%淀粉液、1%蔗糖、0.1%尿素液 大豆尿素酶溶液、0.1%CuSO4、0.1%HgCl2 0.1%NaCl、1M NaOH、0.5M H2SO4、碘液 各种pH缓冲液：5.0；6.8；8.0 实验步骤 一 温度对唾液淀粉酶的影响 1.稀释唾液的准备。 2.准备好37℃水浴、冰水浴及沸水浴，点滴板加碘液 各1滴，备用。 3.取小试管4支，编号，各加1%淀粉溶液30滴，pH 6.8缓冲液10滴。1号管作对照，2号管放37℃水浴, 3号管放冰水浴，4号管放沸水浴中，各预温10min。 4.向1号管加蒸馏水10滴，向2，3和4号管各加稀释唾 液10滴，混匀放原水浴中。 5.5min后由2号管每隔一定时间（1min或2min），取 液1滴于白瓷凹板上做碘反应，观察并记录颜色变 化情况，到碘反应接近浅红色时，取出各管，包括 1号管，分别各取1滴做碘反应，观察对比结果。 6.把4支试管放入37℃水浴下，5~10min后取出，向各 管内加碘液2滴，混匀，观察结果。综合分析所测 三种温度下的酶活性情况，并以1号管为对照说明 冰水浴及沸水浴两温度对酶活性影响的异同。 ? 试管号? 1? ?2 ?3 ?4 第一次碘反应? ? ? ? ? ?第二次碘反应 ? ? ? ? 二 pH对唾液淀粉酶的影响 4.5号管加稀释唾液10滴，放37℃水浴中，记录时间，每隔1min或2min，由第5号试管中取出1滴溶液做碘反应，待碘反应呈浅红色或橙黄色时，取出试管记录保温时间。 5.1~4号试管放入37℃水浴中，向1号管加10滴蒸馏水。以1min间隔，并记录时间，依次向2~4号试管中加入稀释唾液10滴，摇匀，按照5号管的保温时间，以1min间隔，依次取出各管，并立即加碘液2滴，混匀。向1号管加2滴碘液。观察各管颜色，判断在同pH条件下淀粉被水解的程度，分析pH对淀粉酶活性的影响，确定其最适pH。 ?时间（min） 试管号? ?1 ?2 ?3 4? 1 ?2 ?3 ?4 ? ? ? ? 三 抑制剂对唾液淀粉酶的影响 试剂（滴）? ? ?管 ?号 ? 1? ?2 ?3 4? ?1%淀粉 ?30 ?30 30? 30? pH=6.8缓冲液 10 10 10 10 0.1%CuSO4 10 — — — 0.1%NaCl — 10 — — 蒸馏水 — — 10 — ?0.1%HgCl2 —? —? ?— 10? 稀释唾液的准备 取点滴板1个，向白瓷凹板内各加碘液1滴，准备好37℃水浴 取小试管3支，如下表加入试剂 5min后由2号试管每隔1min,取液滴于白瓷凹板上做碘反应，观察记录颜色变化情况，至反应为浅 色时，取出各试管，分别取1滴做碘反应，对比结果。 实验记录 ?试管号 1? ?2 ?3 4? ?反应颜色 ? ? ? ? ?时间（min） 5? 6? 7? 8? 9? 反应颜色? ? ? ? ? ? 2号试管 * *