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怎样提取淀粉酶
怎么提取淀粉酶? 姓名 学号 姓名 学号 曾沛权 201230247 何昺辉 201030201 游锐 201230246 姚敦锦 201030344 麦心懿 201230250 陈大海 201130114 许艳 201230249 钟升旺 201030311 王丹 201230254 肖佐欣 201030207 张淙华 201230252 曹雅雯 201030239 封雨 201230255 余路 201130126 主讲人 : 宗伍辈 201210105 淀粉酶: 指作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖元等α-1,4-葡聚糖,水 解α-1,4-糖苷键的酶。 根据作用的方式可分为α-淀粉酶与β-淀粉酶。 (1)α-淀粉酶: 广泛分布于动物(唾液、胰脏等)、植物(麦芽、山萮菜)及微生物。微生物的酶几乎都是分泌性的。此酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子,既作用于直链淀粉,亦作用于支链淀粉,无差别地切断α-1,4-链。 (2)β-淀粉酶: 与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐 次以麦芽糖为单位切断α-1,4-葡聚糖链。 微生物、植物和动物都可做为制备淀粉酶的原材料。 1、对现有含有的动植物组织进行提取纯化。 2、进行微生物分泌淀粉酶或通过基因工程对微生物进行改造大量生产淀粉酶。 (一)根据淀粉酶溶解度不同的分离方法 1、硫酸铵盐析法 2、等电点沉淀法 3、低温有机溶剂沉淀法 (二)根据淀粉酶分子大小的差别的分离方法 1、透析与超滤 2、凝胶过滤法 (三)根据淀粉酶带电性质进行分离 1、电泳法 2、离子交换层析法 1、硫酸铵盐析法 《淀粉酶的纯化_硫酸铵盐析法中几种激活剂对酶回收率的影响》 1、三角瓶取酶液50ml 2、加入25%CaCl2 5ml 加入45ml 蒸馏水 静置4 h 3、加入硫酸铵60g,搅拌完全溶解。静置24小时,过滤, 4、滤物,在40度 烘干。即淀粉酶。 2、电泳法 电泳步骤: 1、淀粉酶的粗提取液 2、电泳槽的组装,制胶 3、标准液的制备 4、点样 5、电泳 6、固定,染色,脱色 7、切胶,捣碎过滤提取,或透析。 烘干 4、点样 用移液枪吸取10ul标准品加入到第一个样孔中,然后再吸取样品依次加入到各个加样孔中,为了获得准确的结果,样品应做两次重复。 5、 电泳 将电泳槽与电泳仪连结,在电泳槽中加入已经稀释的电极缓冲液,打开电源,选择合适电压,保持恒电压80--120V,进行电泳,直至样品中燃料迁移至离下端1cm处,停
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