使用规律间隔的短回文重复序列cas9系统研究转化生长因子β1在小鼠.pdfVIP

( ) 2016 4 6 2 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), Apr 2016,Vol. 6, No. 2 70 中华细胞与干细胞杂志 电子版 年 月第 卷第 期 •论著• 使用规律间隔的短回文重复序列 cas9 系统研究 转化生长因子 β1 在小鼠黑色素瘤细胞中的作用 王萍 马予洁 王庆华 路君 谭建明 【摘要】 目的研究在小鼠黑色素瘤细胞系（B16 ）中使用成簇的、规律间隔的短回 CRISPR β1 TGF-β1 文重复序列（ ）靶向敲除转化生长因子 （ ）后，细胞体外增殖、侵袭、迁 移能力的变化。方法 使用 CRISPR-cas9 系统建立敲除 TGF-β1 的小鼠黑色素瘤细胞系， 用细胞培养计数法检测对照组、载体对照组与 TGF-β1- 组 B16 细胞的生长速度，用平板 克隆与软琼脂克隆实验来检测三组细胞体外增殖能力，分别用 Transwell 小室与加基质胶 Transwell 小室检测三组细胞的体外迁移与侵袭能力。结果 成功建立 TGF-β1 敲除了的 B16 24 48 72 96 h 3 P 细胞系，生长曲线在 、 、 、 测得 组细胞数目之间差异均无统计学意义（ 0.05 TGF-β1- 0.067 ± 0.032 均 ）；平板克隆一周结果显示： 组的克隆形成率 小于载体对照 0.489 ± 0.034 0.633 ± 0.041 F = 198.710 P = 0.000 组 ，而载体对照组小于对照组 ， ， ；平板克隆 2 TGF-β- 0.443 ± 0.012 0.489 ± 0.064 周时， 组的细胞克隆形成率 与对照组 均大于载体对照 0.370 ± 0.005 F = 7.599 P = 0.023 TGF-β- 组 ， ， ；还发现虽然 组的克隆形成数量多，但是克隆的 直径小于其他两对照组；软琼脂克隆实验：对照组的形成率 0.008 ± 0.0001 低于载体对照 0.012 ± 0.0006 TGF-β1- 0.012 ± 0.0007 F = 65.39 P 0.0001 组 与 组 ， ， 。侵袭能力实验显示： TGF-β1- B16 12 ± 4.359 101 ± 18.735 组穿过膜的 细胞数目（ ）个明显的低于对照组（ ）个与 100 ± 8.889 F = 52.34 P = 0.0002 TGF-β1- 载体对照组细胞（ ）个， ， ；迁移能力实验结果显示： B16 Transwell 2.037 ± 0.132 4.07 ± 0.481 组的 通过 膜的细胞数量（ ）个明显的少于对照组（