信号转导与转录活化因子6过表达和抑制表达对结肠癌rko-tumor.pdfVIP

668 　　肿瘤2012 年9 月第32 卷第9 期　TUM OR Vol. 32, September 2012 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2012 .09.002 Copyright© 2012 by TUM OR Basic Research 基础研究 · 信号转导与转录活化因子6过表达和抑制表达对结肠癌RKO细胞增殖 及迁移的影响 1, 2 2 2 2 2 1, 2 杨青青 ，李晓云 ，陈　健 ，彭翼飞 ，马文丽 ，郑文岭 1. 上海大学生命科学院，上海　200444 ；2 . 南方医科大学基因工程研究所，广东广州　510515 [摘要]　目的：分别构建信号转导与转录活化因子 6 （signal transducer and activator of transcription 6 ，STAT6 ） 过表达及 RNA 干扰 （RNA interference ，RNAi ）慢病毒载体，研究 STAT 6 基因表达对人结肠癌 RKO 细胞增殖 和迁移的影响。方法：以人胚肾 HEK293FT 细胞 cDNA 为模板，PCR 扩增 STAT 6 基因的完整开放阅读框 （open reading frame ，ORF ）片段，化学合成针对 STAT 6 基因的 RNAi 靶向单链片段，通过 pLVTHm 慢病毒载体三质 粒包装系统对以上 2 种片段进行慢病毒颗粒包装；再用病毒感染结肠癌 RKO 细胞，获得稳定表达 STAT6-ORF 和 STAT6-RNAi 的细胞株。RT-PCR 和蛋 白质印迹法检测稳定感染细胞株中STAT 6 基因的表达情况，CCK8 法检 测细胞活性的变化，Transwell 实验检测细胞迁移能力的变化。结果：成功构建 STAT6-ORF 和 STAT6-RNAi 慢病 毒表达载体，并获得稳定表达 STAT6 的相应 RKO 细胞株。与对照组细胞相比，STAT6-ORF 转染组细胞的增殖 速度加快不明显 （ P ＝0.609 ），细胞迁移能力显著增强 （P ＜ 0.01 ）；而 STAT6-RNAi 转染组的细胞活性显著降低 （P ＜ 0.001 ），迁移能力显著下降 （P ＜ 0.01 ）。结论：STAT6 可能是促进结肠癌细胞增殖和迁移的重要转录因子。 [关键词]　结肠肿瘤；STAT6 转录因子；基因表达；RNA 干扰；细胞增殖；细胞迁移分析；RKO 细胞 [中图分类号]　R735.3＋5 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431 (2012) 09-0668-07 Effects of overexpression and expression-suppression of STAT 6 gene on proliferation and migration of colon cancer RKO cells 1, 2 2 2 2 2 1, 2 YANG Qing-qing , LI Xiao-yun , CHEN Jian , PENG Yi-fei , MA Wen-li , ZHENG Wen-ling 1. School of Life Sciences, Shanghai University, Shanghai 200444, China; 2. Institute of Genetic Engineering, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China [A BSTRA CT]　Objective: To construct th