嘉临江大鳍鳠染色体组型研究.doc

嘉临江大鳍鳠染色体组型研究 　　摘要 采用PHA、秋水仙碱腹腔注射，活体培养法，取大鳍鳠肾细胞制成悬浮液。用空气干燥法制片，经Giemsa染色，镜检细胞分裂相，结果表明：大鳍鳠染色体二倍数2n=56，核型公式为：2n=20 m+16 sm+10 st+10 t，NF=92。 关键词 大鳍鳠；染色体；核型 中图分类号 Q343.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）02-0260-02 大鳍鳠（Mystus macropterus Bleeker）属鲶形目鲿科鳠属，主要在长江水系、珠江水系上游分布，其肉质细嫩，味道鲜美，无肌间刺，销售价格较高，具有极好的养殖前景[1]。大鳍鳠为底栖性鱼类，喜群集，怕光，一般在晚上觅食，以水生昆虫、底栖动物、小虾、小鱼等为主食。大鳍鳠是我国特有的经济鱼类。通过对长江上游干、支流的大鳍鳠资源调查，发现渔获物中1、2龄的比重占46.3%，种群小型化、低龄化明显[2]。对嘉临江大鳍鳠染色体核型进行研究，了解嘉临江大鳍鳠的染色体组特征，以为大鳍鳠的驯化繁殖、品种选育奠定基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料 供试鱼种为2011年5—12月在嘉临江捕获的体长20～21 cm、体重100～120 g的活体大鳍鳠，在实验室暂养。共30尾。 1.2 研究方法 1.2.1 制备染色体标本。给大鳍鳠注射植物血细胞凝集素（PHA）3 μg/g·体重，注射部位为胸鳍基部体腔，12 h/次，24 h后注射秋水仙素4 μg/g。3.5 h后断尾放血30 min，解剖取头肾，使用0.75%鱼用生理盐水进行清洗，连续清洗2～3次。将头肾在生理盐水中剪碎，静置，取上层细胞悬液，1 000 r/min离心8 min，收集下层细胞，加入0.075 mol/L KCl低渗液，水浴锅中37 ℃条件下处理30 min，1 000 r/min离心10 min收集细胞。再用预冷的卡诺氏固定液（甲醇∶冰醋酸=1∶3）固定30 min，冰冻玻片滴片，空气干燥法制片，Giemsa染色。 1.2.2 核型分析。选取10个数目完整、长度适宜、分散较佳、着丝点清楚、2条单体适度分开、形态清晰的分裂相（中期）在1 000倍下进行显微摄影，经photoshop 7.0处理，确认染色体的着丝点位置，测量长臂、短臂，计算相对长度和臂比值，并按Levan[3]提出的标准对染色体进行配对分组，作出核型图。 2 结果与分析 2.1 染色体数目 选择不同个体的100个染色体，要求其清晰，分散良好，根据常规标准统计大鳍鳠染色体数目，即要求染色体众数占检测细胞数的75%以上。由表1可知，中期分裂相的染色体数目在56条以下、56条、56条以上的出现次数分别为7、83、10次，出现频率分别为7%、83%（2n75%）、10%。因此，可认定大鳍鳠染色体二倍数2n=56。 2.2 染色体核型 从核型分析结果（图1、2）可以看出，大鳍鳠亚中着丝点染色体（sm）、中部着丝点染色体（m）、端部着丝点染色体（t）分别为8、10、5对。其核型为2n=20 m+16 sm+10st+10t。根据Matthey的建议，中部和亚中部、亚端部和端部着丝点染色体的臂数分别计为2、1，其染色体臂数NF为92。 从表2可知，大鳍鳠亚中部着丝点染色体的第1对（sm1）相对长度最长，为2.685+0.012，亚中部着丝点染色体（sm）的平均相对长度均较大，端部着丝点染色体（t）平均相对长度较小。 3 讨论 对于大鳍鳠不同分类群、种类的比较，能够通过异同染色体核型的分析获得，通过比较鱼类间核型的差异性，研究鱼类的亲缘关系。虽然当前对鱼类的进化研究已可以利用基因技术进行，采用分子遗传学技术来演绎鱼类的进化关系，但核型的演化在判断物种亲缘关系、进化方面仍有重要作用[4]。从表3可知，鮠属、黄颡鱼属、拟鲿属核型组成比较相似，鮠属、黄颡鱼属、拟鲿属没有端部着丝点染色体（t）或较少（拟鲿属细体拟鲿除外），而鳠属端部着丝点染色体（t）较多。李树深[5]研究指出，在特定的分类阶元中，原始类型有较多的t，特化类型有m与sm染色体较多。因此，与鮠属、黄颡鱼属、拟鲿属相比，鳠属较原始，但在核型特化上各属较一致，尤其是黄颡鱼属的黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼；鳠属的大鳍鳠；拟鲿属圆尾拟鲿、乌苏里拟鲿、凹尾拟鲿、切尾拟鲿；鮠属的粗唇鮠特化明显[6-7]。 小岛吉雄[8]研究指出，鱼类进化越处于上位，部着丝点染色体越多，染色体越收敛，端臂数少。大鳍鳠二倍体染色体56，比同科其他鱼类都多。其端部着丝点染色体（t）为5对，而长须黄颡鱼、圆尾拟鲿、光泽黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼、长尾鮠、乌苏里拟鲿、切尾拟鲿端部着丝点染色体（t）均为0