酶联免疫吸附反应［ ELISA ］Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay幻灯片.ppt

饲料中盐酸克伦特罗的测定 饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素， 简曲霉毒素 ） 饲料中有害微生物的快速筛检 （如沙门氏菌 ） 甲胺磷残留分析 甲基对硫磷残留分析 呋喃丹残留分析 ELISA在饲料安全检测中的应用 ELISA用于农药残留的检测 河豚毒素 植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素 苯并芘 主要有除草剂与杀虫剂两大类 例如杀暝松（ FN ）、 甲氟磷酸异已酶（ SOMAN ）、 草不绿（ Alachor ）、 西维因（ Carbaryl ）、 多菌灵及克菌丹（ Captan ）等。 农药的检测 ELISA检测 “非典型肺炎”冠状病毒 ELISA在结缔组织病早期诊断中的应用检测抗异质性胞核核糖蛋白A2（hnRNPA2）/类风湿性关节炎（PtA）33抗体 ELISA在疾病诊断中的作用 ELISA法检测幽门螺杆菌抗体 其他一些酶标记免疫技术 斑点酶免疫吸附实验 此试验所用固相载体对蛋白质具有极强吸附力的醋酸纤维膜。 优点：NC膜吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度高；试剂用量少；操作简便，不需特殊设备；吸附抗原或已有结果的NC可长期保存。 生物素-亲和素放大系统（BAS） 生物素-亲和素系统是以生物素-亲和素具有的独特结合特性为基础，结合二者即可偶联抗原抗体等大分子生物活性物质，他们的结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。 优点 1. 灵敏度高 2. 特异性强（不增加非特异性干扰） 3. 稳定性好 4. 适用性强 酶联免疫吸附反应（ ELISA ）Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay 一、ELISA简介 二、ELISA原理 三、ELISA分类 四、ELISA相关试剂 五、ELISA影响因素 六、ELISA应用 一、ELISA简介 1971年瑞典学者 Engvall和Perlmann，荷兰学者Van Weeman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，称为酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA）。 自上世纪70年代初问世以来， ELISA发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 二、ELISA原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。 在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的 量直接相关，故可根据呈色的深浅进行 定性或定量分析。 ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂） 抗原 凡是能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞并能与之结合引起特异性反应的物质称为抗原（antigen）。 抗原的分子结构十分复杂，但抗原分子的活性和特异性并不是决定于整个抗原分子，决定其免疫活性的只是其中的一小部分抗原区域。抗原分子表面具有特殊立体构型和免疫活性的化学基团称为抗原决定簇（antigenic determinant）或抗原决定基。 抗体 动物机体受到抗原物质刺激后，由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的，能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白，这类免疫球蛋白称为抗体（antibody，Ab）。 免疫球蛋白是蛋白质，因此一种动物的免疫球蛋白对另一种动物而言是良好的抗原。免疫球蛋白不仅在异种动物之间具有抗原性，而且在同一种属动物不同个体之间，以及自身体内同样是一种抗原物质。 免疫标记技术 放射物标记技术 酶标技术 免疫荧光技术 其他标记技术 酶联免疫吸附技术 酶免疫组化技术 双抗体夹心法 竞 争 法 双抗原夹心法 间 接 法 三、ELISA分类 双抗体夹心法 竞争法 间接法 ELISA基本实验过程 包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附到固相载体表面，使抗原或抗体固相化 抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶结合物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定 酶促反应：在反应体系中加入酶作用的底物，使发生酶促反应而显色 实验中对照的设置 阳性对照 阴性对照 空白对照 临界标准品 四、ELISA相关试剂 01.印迹膜 02.封闭液 03.样品稀释液 04.浓缩洗涤液（10X） 05.酶联物 06.AP底