人cd96基因胞外区的原核表达及抗血清制备-南方医科大学学报.pdfVIP

·1232 · 南方医科大学学报（J South Med Univ ） 2011;31(7) ·基础研究· 人CD96 基因胞外区的原核表达及抗血清制备 1 2 3 1 1 1 1 1 1 1 曾建明 ，刘飞 ，谭坪海 ，王丽娜 ，李沫 ，陈中华 ，李 松 ，龙一飞 ，李有强 ，陈 茶 1 2 3 广东省中医院检验科，广东 广州510120 ；南方医科大学南方医院检验科，广东 广州510515 ；广东医学院检 验学院，广东 东莞 523808 摘要：目的原核表达并纯化人CD96 胞外区蛋白，免疫家兔制备抗体。方法 构建pET32-CD96 重组质粒，转化大肠埃希 菌BL21(DE3) ，以IPTG 诱导表达，Ni2+-NTA 树脂纯化蛋白并免疫家兔，以间接ELISA 检测抗体效价，Western blot 鉴定抗 体特异性。结果质粒pET32-CD96 经测序鉴定，通过SDS 电泳显示能在BL21(DE3) 中高效表达，相对分子质量约37 000 ； Western blot 实验结果显示制备的多克隆抗体可与HL-60 细胞提取蛋白及原核表达的人CD96 蛋白胞外区特异性结合。 结论 成功构建并表达人CD96胞外区蛋白，免疫家兔获得高滴度抗血清，为后续研究奠定了基础。 关键词：人CD96基因；原核表达；白血病干细胞；多克隆抗体 中图分类号：R392 文献标志码：A 文章编号：1673-4254(2011)07-1232-04 Human CD96 gene cloning, expression and identification 1 2 3 1 1 1 1 1 1 ZENG Jian-ming , LIU Fei , TAN Ping-hai , WANG Li-na , LI Mo , CHEN Zhong-hua , Li Song , LONG Yi-fei , LI You-qiang , CHEN Cha1 1Department of Laboratory Medicine, Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510120, China; 2Department of Laboratory Medicine, Nanfang Hospital Southern Medical Univesity, Guangzhou 510515, China; 3Institute of Laboratory Medicine, Guangdong Medical College, Dongguan 523808, China Abstract: Objective To construct and express human CD96 gene outer membrane domain (hCD96om) in prokaryotic cells and prepare rabbit polyclonal antibody of hCD96om. Methods hCD96om was amplified by