干扰pml对人髓系白血病thp-1细胞增殖和凋亡的影响及机制探讨.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2016, 38(7): 802–810 DOI: 10.11844/cj cb.2016.07.0097 干扰PML对人髓系白血病THP-1细胞增殖和 凋亡的影响及机制探讨 邹 琴 张帅帅 鲜敬荣 金红君 杨丽媛 高 张 伶* (重庆医科大学检验医学院, 临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆市重点实验室, 重庆400016) PML α α 摘要 早幼粒白血病(promyelocytic leukemia, )基因与维甲酸受体 (retinoic acid receptor , RARα)基因形成PML-RARα融合基因是急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL) PML PML 发生的分子基础, 而 在除APL外的其他髓系白血病亚型中的作用研究少见报道。为探讨 在非APL的髓系白血病恶性表型中的调控作用及潜在机制, 该文首先通过qPCR和Western blot检 PML 测了5株非APL来源的髓系白血病细胞中PML的表达水平。接着将靶向 基因的shRNA慢病毒 (shPML group)感染高表达PML的THP-1细胞; 同时, 设立未处理对照组(Mock group)和阴性对照组 (Scramble group), 嘌呤霉素筛选稳定表达shPML的细胞株。qPCR和Western blot检测shRNA干扰效 率; CCK-8检测细胞体外增殖活性, 克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力; 流式细胞术检测细 胞凋亡率; Western blot检测凋亡相关蛋白质Bcl-2 、Bax水平和AKT及下游靶分子Foxo3a磷酸化蛋 白质水平的改变。结果显示, 5株髓系白血病细胞中PML mRNA和蛋白质水平不同, 其中以THP-1 PML 细胞中的PML表达水平较高。靶向 基因的shRNA慢病毒感染THP-1细胞后, PML mRNA和蛋 白质水平均明显下降, 提示成功构建稳定表达shPML的THP-1细胞株。与Mock组和Scramble组相 比, shPML组的细胞增殖能力显著增强(P0.05), 细胞凋亡率显著降低(P0.05); 同时, 抗凋亡蛋白 Bcl-2水平升高、促凋亡蛋白Bax水平降低; 此外, 干扰PML表达可增加pAKT(S473)及下游靶分子 pFoxo3a(S253)的蛋白质水平, 而总AKT和Foxo3a的蛋白质水平未见明显变化。该研究的结果提示, PML PML 基因可能通过调控AKT/Foxo3a信号通路活性抑制白血病的恶性表型, 表明 在不同白血病 型别中发挥着不同的作用。 关键词 PML; 髓系白血病; 增殖; 凋亡; AKT Effects of Promyelocytic Leukemia (PML) Gene Knockdown on Apoptosis and Proliferation of Human Myeloid Leukemia THP-1 Cells and Its Potential Mechanism Zou Qin, Zhang Shuaishuai, Xian Jingrong, Jin Hongju