标准化的试剂盒方法对大鼠血浆中的英夫利昔单抗进行高-waters.pdfVIP

[ 应用纪要 ] 采用快速、标准化的试剂盒方法对大鼠血浆中的 英夫利昔单抗进行高灵敏度的定量分析 Mary Lame, Hua Yang, Sherri Naughton和Erin Chambers 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 简介 ■ 简单、标准化的蛋白定量方法；普遍 随着越来越多的药物开发聚焦于抗体或ADC等大分子，研究传统“小 适用的优化酶解套装，为新药研发省 分子”的科学家面临着挑战，这种挑战不仅来源于小分子研究复杂 去了方法开发步骤；仅需4–6小时即可 且耗时的特点，还来自于使用LC-MS进行蛋白定量时可能会涉及的多 完成LC-MS分析的样品前处理；分析英 个工作流程。经常使用ELISA和其它免疫亲和(IA)方法研究蛋白质生 夫利昔单抗获得了10 ng/mL的高灵敏度 物标志物的研究人员也面临同样的问题。虽然IA方法非常灵敏且操 检测限。 作简单，但其试剂重现性较差、缺乏标准化方法和交叉反应、线性 动态范围有限，还有其它一些缺点，由此推动了转向LC-MS 的方法开 发，尤其是在发现研究和早期开发/ 临床前研究领域。然而，LC-MS 工作流程包含多个子部分，每个子部分又包含许多步骤。有关特定 试剂以及每个步骤的时间、温度和试剂浓度都可影响灵敏度，导致 我们很难快速获得能够达到期望检测限的方法。本应用纪要描述了 使用ProteinWorks eXpress酶解套装和方案快速、灵敏地对大鼠血浆中 的英夫利昔单抗进行定量分析(图 1)的方法。采用一套通用的样品 前处理方法，使用经预先称重且具有批次可溯源性的试剂，在一系 列精心开发的通用型简单分步操作说明的指导下分析英夫利昔单抗， 沃特世解决方案 可达到10 ng/mL的LLOQ (定量下限)。 ProteinWorks™ eXpress酶解套装 完整单克隆抗体检测标准品 (部件号186006552) ® ACQUITY UPLC Peptide BEH C 18, 300Å 1.7 µm, 2.1 mm x 150 mm肽分析专用柱 (部件号186003687) ACQUITY UPLC Xevo® TQ-S质谱仪 ProteinWorks µElution SPE净化试剂盒 分子式： C 6428H9912N1694O1987S46 分子量：约 ~ 149.1 kD http://www.drugbank.ca/drugs/DB00065 关键词 图1. 英夫利昔单抗(Remicade)的蛋白质结构。 单克隆抗体，英夫利昔单抗，Remicade ， 蛋白定量，eXpress酶解 1 [ 应用纪要 ] 实验 样品描述 锥孔