苹果细胞质型苹果酸脱氢酶基因克隆表达及酶活性分析-园艺学报.pdfVIP

园　艺 　学 　报 　2008, 35 (2) : 181 - 188 A cta Horticu lturae Sin ica 苹果细胞质型苹果酸脱氢酶基因克隆、表达及酶活 性分析 1 1 1 1 2 1 姚玉新 , 郝玉金 , 李 　明 , 庞明利 , 刘 　志 , 翟 　衡 (1 山东农业大学园艺科学与工程学院 , 作物生物学国家重点实验室 , 山东泰安 27 10 18; 2 辽宁省果树科学研究所 , 辽宁熊岳 1152 14) 摘 　要 : 根据亚细胞定位 , 苹果酸脱氢酶可分为 5种类型 , 其中依赖于 NAD 的细胞质型苹果酸脱氢酶 ( cyMDH ) 在植物上 的研究较少 。从苹果果实 中分离 了 cyM DH 的全长 cDNA 序列 , 命名为 M a lcyM DH ( GenB ank登录号为 DQ22 1207 ) , 该序列含有一个 996 bp 的开放阅读框 (ORF ) 。序列同源性分析表 明 M alcyMDH与其他物种 cyMDH 有较高的同源性 , 进化树分析表明几乎所有的 cyMDH 可以聚类在一个分支 上 , 并且 cyMDH 可能是 MDH 的最原始种 。原核表达得到一个 37 kD 左右的融合蛋白, 酶活测定表明该酶 主要催化合成苹果酸 。苹果果实中 cyMDH 酶活分析表明在高酸和低酸基因型中该酶的还原活性存在明显差 异 。 关键词 : 苹果 ; 细胞质型苹果酸脱氢酶 ; 基因; 克隆; 原核表达 ; 酶活性 中图分类号 : S 66 11　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 0513353X (2008) Gene C lon ing, Expression and Enzym e A ctiv ity A ssay of a Cy tosolic M a la te D ehydrogena se from A pple Fru its 1 1 1 1 2 1 YAO Yuxin , HAO Yu j in , L IM ing , PAN G M ingli , L IU Zh i , and ZHA I H eng (1 Colleg e of H orticu ltu ra l S cience and E ng ineering, S handong A g ricu ltu ra l Un iversity, S ta te Key L abora tory of C rop B iology, Ta ian, S handong 27 1018, Ch ina; 2L iaon ing R esea rch Ins titu te of P om ology, X iongy ue, L iaon ing 1152 14, Ch ina) A b stract: M alate dehydrogena se (MDH ) ub iqu itou sly exists in an im als, p lan ts and m icroogan ism s, and catalyze s the in terconversion from oxaloacetate to m alate. Cyto so lic NAD dep enden t MDH gene ( cyM DH ) en code s a key enzym e crucial for m alic acid syn the sis in the