萼脊兰tub基因片段的克隆及序列分析-华北农学报.pdfVIP

华北农学报 ·２０１５，３０（４）：３１３４ 萼脊兰ＴＵＢ基因片段的克隆及序列分析 １ １ ２ ３ １ １ 蒋素华 ，梁　芳 ，王洁琼 ，李艳辉 ，王默霏 ，崔　波 （１．郑州师范学院 生物工程研究所，河南 郑州　４５００４４；２．河南农业大学 生命科学学院，河南 郑州　４５０００２； ３．封丘县农业局，河南 新乡　４５３３００） 　　摘要：为了给筛选萼脊兰内参基因和研究 ＴＵＢ基因的生理功能提供研究基础，对萼脊兰 ＴＵＢ基因片段进行克隆 与序列分析。采用 ＣＴＡＢ法提取萼脊兰盛花期花瓣总 ＲＮＡ，并运用 ＲＴＰＣＲ方法克隆萼脊兰 ＴＵＢ基因序列，长度为 １０５５ｂｐ，编码３５１个氨基酸残基，氨基酸序列中存在微管蛋白的保守区域 ＧＧＧＴＧＳＧ。序列分析结果表明：与其他已 登录物种的ＴＵＢ基因相比，其核苷酸序列的同源性达７５％～９６％，与朵丽蝶兰（ＪＮ１８５６６５．１）同源性高达９６％，氨基酸 序列的同源性也在 ９６％以上，且与单子叶植物的同源序列表现出较高的相似性。在 ＧｅｎＢａｎｋ注册，登录号为 ＫＰ６８６３９７。 关键词：萼脊兰；ＴＵＢ基因；克隆；序列分析 中图分类号：Ｑ７８６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－７０９１（２０１５）０４－００３１－０４ ｄｏｉ：１０．７６６８／ｈｂｎｘｂ．２０１５．０４．００６ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＴＵＢＧｅｎｅＦｒａｇｍｅｎｔｆｒｏｍＳｅｄｉｒｅａｊａｐｏｎｉｃａ １ １ ２ ３ １ １ ＪＩＡＮＧＳｕｈｕａ，ＬＩＡＮＧＦａｎｇ，ＷＡＮＧＪｉｅｑｉｏｎｇ，ＬＩＹａｎｈｕｉ，ＷＡＮＧＭｏｆｅｉ，ＣＵＩＢｏ （１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＮｏｒｍａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５００４４，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ， ＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５０００２，Ｃｈｉｎａ；３．ＦｅｎｇｑｉｕＢｕｒｅａｕｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ　４５３３００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴＵＢｏｆＳｅｄｉｒｅａｊａｐｏｎｉｃａｗａｓｃｌｏｎｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｚｅｄ，ａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｗｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅａｎｉｍｐｏｒ ｔａｎｔｂａｓｉｓｆｏｒｓｅｌｅｃｔｉｎｇａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｇｅｎｅａｎｄｓｔｕｄｙｉｎｇｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＴＵＢ．ＴｈｅｔｏｔａｌＲＮＡｏｆＳｅｄｉｒｅａｊａｐｏｎｉｃａｓｃａｐｅｓ ｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｐａｒｔｉａｌｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＳｅｄｉｒｅａｊａｐｏｎｉｃａＴＵＢｗａｓｃｌｏｎｅｄｂｙＲＴＰＣＲ，ｗｈｉｃｈｗａｓ １０５５ｂｐｌｏｎｇａｎｄｅｎｃｏｄｅｄ３５１ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｒｅｓｉｄｕｅｓ．Ｉｔｓａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｃｏｎｔａｉｎｅｄａｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｒｅｇｉｏｎ ＧＧＧＴＧＳＧ．ＴｈｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅＴＵＢｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｆｒｏｍＳｅｄｉｒｅａｊａｐｏｎｉｃａｈｏｍｏｌｏｇｙｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈｏｔｈｅｒｐｌａｎｔｓＴＵＢｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｎｔｈｅＧｅｎＢａｎｋｓｈｏｗｓｔｈａｔｔｈｅｙｓｈａｒｅ７５％－９６％ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｈｏ ｍｏｌｏｇｙ，９６％ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈＤｏｒｉｔａｅｎｏｐｓｉｓｈｙｂｒｉｄＴＵＢ，ｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｈｏｍｏｌｏｇｙｉｓａ ｂｏｖｅ９６％ ａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｈｏｍｏｌｏｇｙｈｉｇｈｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｗｉｔｈｔｈｅｍｏｎｏｃｏｔｙｌｅｄｏｎ．ＴｈｅｃｌｏｎｅｄｇｅｎｅｓｗｅｒｅＴＵＢ ｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄｔｈｅｍｉｎｔｏＧｅｎＢａｎｋ（ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅａ