转基因柑橘外源基因拷贝数的实时荧光定量pcr检测-园艺学报.pdfVIP

园艺学报，2016 ，43 (6) ：1186 –1194. Acta Horticulturae Sinica 1186 doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0081；http ：//www. ahs. ac. cn 转基因柑橘外源基因拷贝数的实时荧光定量 PCR 检测 * 许兰珍，何永睿，雷天刚，彭爱红，姚利晓，姜国金，李 强，邹修平 ， * 陈善春 （西南大学/ 中国农业科学院柑桔研究所，国家柑桔工程技术研究中心，国家柑桔品种改良中心，重庆 400712 ） 摘 要：为分析转基因柑橘中外源基因整合拷贝数，基于实时荧光定量 PCR 法，建立通用、准确、 简便的转基因柑橘外源基因拷贝数检测体系，利用该体系成功检测了 150 个转基因柑橘单株系外源基因 整合拷贝数。结果表明，转基因柑橘中外源基因整合最低拷贝数为 1，最高达 5 个，其中 1、2 和 ≥ 3 拷贝的单株数分别占总数的 40.0% 、18.0%和 42.0% ；采用 Southern blot 技术进行检测，结果基本一致， 极少数单株经实时荧光定量 PCR 分析的拷贝数比 Southern blot 检测的数值高。说明本研究建立的实时荧 光定量 PCR 方法检测转基因柑橘外源基因整合拷贝数更加准确可靠。拷贝数为 1 ~ 2 的转基因株系可作为 将来开展转基因目标性状研究及转基因生物安全性评价有利用价值的试验材料。 关键词：柑橘；实时荧光定量 PCR ；转基因；拷贝数；Southern blot 中图分类号：S 666 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2016 ）06-1186-09 Identification of the Copy Number of Exogenous Gene in Transgenic Citrus by Quantitative Real-time PCR XU Lan-zhen ，HE Yong-rui ，LEI Tian-gang ，PENG Ai-hong ，YAO Li-xiao ，JIANG Guo-jin ，LI Qiang ， * * ZOU Xiu-ping ，and CHEN Shan-chun （Citrus Research Institute，Southwest University/Chinese Academy of Agricultural Sciences ；National Citrus Engineering Research Center ；National Center for Citrus Varieties Improvement ，Chongqing 400712 ，China ） Abstract ：The copy number of exogenous gene is an important factor influencing the expression and genetic stability of the target gene. Currently，transgene copy numbers by Southern blot ，which is laborious and time-consuming ，requires relatively large amounts of plant materials and more experimental technology. Here ，based on qu