非生物胁迫下多年生黑麦草qrt-pcr分析中内参基因的选择.pdfVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2014, 22(12): 1494~1501 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2014.12.004 非生物胁迫下多年生黑麦草qRT-PCR 分析中内参基因的选择 严海东 蒋晓梅 张新全 黄琳凯* 四川农业大学动物科技学院草业科学系，雅安625014 *通讯作者, huanglinkai@ 摘 要 提高实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR, qRT-PCR)准确性的先决条件是选择表达稳 定性较高的内参基因。本研究以多年生黑麦草(LoliumperenneL.)为材料，利用qRT-PCR 技术检测翻译起 始因子4A(eukaryotic initiation factor 4 alpha, eIF4A) 、TNF 结合蛋白Ⅰ(Tat binding protein- 1, TBP-1) 、泛素 连接酶(ubiquitin-conjugating enzyme, E2) 、多聚泛素酶基因(ubiquitin, UBQ) 、生物钟受体蛋白(zeitlupe, ZTL)和甘油醛三磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)6 个候选内参基因在不同 非生物胁迫下的表达情况。运用geNorm(ver. 3.5) 、Normfinder(ver. 0.953) 、BestKeeper(ver. 1.0) 、Delta Ct 和RefFinder 软件综合分析表明，在干旱、盐、热胁迫及ABA 处理下，eIF4A基因表达稳定性最高；在涝胁 迫下，UBQ基因表达稳定性最高。因此，eIF4A和UBQ候选基因可作为不同胁迫下的内参基因，为进一步 开展多年生黑麦草基因表达的定量研究了提供了一定的理论依据。 关键词 多年生黑麦草，qRT-PCR，内参基因，非生物胁迫 Reference Genes for qRT-PCR in Perennial Ryegrass (LoliumperenneL.) Under Various Abiotic Stresses YAN Hai-Dong JIANG Xiao-Mei ZHANG Xin-Quan HUANG Lin-Kai* Department of Grassland Science, Animal Science and Technology, Sichuan Agricultural University, Yaan 625014, China * Corresponding author, huanglinkai@ Abstract The selection of high stablely expressed reference genes is an important prerequisite for improving the accuracy of Real- time quantitative PCR (qRT- PCR). We investigated the expression of 6 candidate reference genes including eukaryotic initiation factor 4 alpha (eIF4A), Ti-binding peptide- 1 (TBP-1), ubiquitin- conjugating enzyme (E2), ubiquitin (UBQ), zeitlupe (ZTL) and glyceraldehyde- 3- phosphate dehydrogenase (GAPDH) under various abiotic stresses in perennial ryegrass (Loliumperenne L.). The analysis with geNorm (ver. 3.5), Normfinder (ver. 0.953), BestKeeper