诱导干细胞分化的胰岛细胞形成胰岛样结构的试验-中国医药生物技术.pdfVIP

中国医药生物技术 2009 年 12 月第4 卷第 6 期 Chin Med Biotechnol, December 2009, Vol. 4, No. 6 417 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2009.06.004 ·论著· 诱导干细胞分化的胰岛细胞形成 胰岛样结构的实验研究 许世清，门秀丽，张文健，娄晋宁，蔡寒青 【摘要】 现今，糖尿病已经成为对人类健康威胁最为严 目的 建立一种体外诱导干细胞分化的胰岛细胞形成胰岛 重的疾病之一。胰岛移植是治疗胰岛素依赖性糖尿 样结构的技术方法。 病的一种有效方法[1-2]，但是人类胰腺供体的短缺严 方法 体外诱导人胚胎胰腺干细胞分化为胰岛细胞，将胰岛 重限制了胰岛移植的临床应用。由于干细胞具有自 细胞制备成浓度分别为 1 × 104 4 5 我更新和分化成为各种组织细胞的潜能，因此将干 /ml 、3 × 10 /ml 、1 × 10 /ml 、 3 × 105 4 4 5 5 细胞诱导分化为胰岛细胞即有可能解决胰岛移植 /ml （1 × 10 /ml 、3 × 10 /ml 、1 × 10 /ml 、3 × 10 /ml 组） 单细胞悬液，在含有细胞外基质（ECM ）的培养基中悬浮 所需要的细胞来源问题。 培养 24 h 以诱导形成胰岛样结构，在荧光体视显微镜下观 胰岛是由多种内分泌细胞包括 β、α、δ 和 pp 察胰岛样结构的形态和大小；采用免疫荧光染色方法检测胰 细胞组成的细胞群体，这一细胞群体不仅具有严格 岛样结构中 ECM 成分及其细胞组成与定位。将胰岛样结 的细胞比例和定位，而且具有特殊的细胞间连接和 构分别在含 5.6 和 30.0 mmol/L 葡萄糖的培养基中体外培 特定的血液供应[3] 。这些细胞所分泌的内分泌激素 养 2 h ，采用放射免疫法测定上清中胰岛素水平。建立糖尿 对促进胰岛 β 细胞的存活和调控胰岛素的分泌都 病大鼠模型，经门静脉将胰岛样结构移植至大鼠肝脏，移植 具有重要作用[4-5]，因此只有将干细胞分化的胰岛细 后连续 3 d 经鼠尾静脉检测血糖水平。 胞诱导形成胰岛样结构才能维持胰岛的正常功能， 同时还应确保移植后的胰岛能够定位于肝窦。 结果 90% 人胚胎胰腺干细胞分化的胰岛细胞形成了胰岛 Bonner-Weir 等[6]报道，将干细胞诱导分化的胰岛 样结构，其包膜、大小均与天然人胰岛组织结构相似；以形 细胞置于含细胞外基质（ECM ）的介质中进行半干 成直径 150 μm 大小胰岛样结构的比例为标准，比较各组细 燥培养可诱使胰岛细胞自发形成胰岛样结构。但是 胞浓度与胰岛样结构形成率的关系，结果显示分别与 1 × 4 4 5 这种技术方法所需时间较长，胰岛样结构的形成率 10 /ml 、3 × 10 /ml 、3 × 10 /ml 组（25.0% ± 2.5% 、28.0% ± 5 低，并且形成的胰岛大小差异很大，尤其不适合大 3.0%、21.5% ± 2.5% ）相比，1 × 10 /ml 组胰岛样结构形成 规模制备。基于此，我们在前期工作的基础上进行 率最佳（36.5% ± 4.0%，均 P 0.01 ）。胰岛样结构包膜上 反复探索