油田 注水细菌试剂方法及对照表.doc

中海油天然气股份有限公司 油藏本源菌常规检测推荐方法及对照表 主题内容与适用范围 本方法的目的是对油田油藏中的本源微生物进行普查，为在油藏中进行的微生物提高采收率作业提供判断与依据。 本标准规定了　　本标准适用于中的。GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂显微镜　　　水浴　吸管：1mL，10mL。　　试管。　　平皿。　接种环或接种针厌氧培养装置的。 1ml 甲酸钠 2.0 复合维生素浓缩液 1ml H2/CO2 80：20 充满试管空间 使用前每5ml培养基加入0.1ml1% Na2S和0.05ml10% NaHCO3 配制水 蒸馏水 PH 7.0—7.2 实验步骤： 无氧无菌储液的制备：先用煮沸除氧、通高纯N2至冷却的蒸馏水作为配剂水。配制以下溶液： 0.1%刃天青。 1% Na2S和10% NaHCO3的溶液，配制过程中继续通入高纯N2，最好压盖后能保持2个大气压。 微量元素浓缩液（配方见表2）：先将4.5克N(CH3COOH)3溶于90ml含NaOH1.8克的水溶液中，再加入其它药品，定容至100ml。 表2：厌氧用微量元素溶液成分（g/100ml） 药品 加量 药品 加量 N(CH3COOH)3 4.5 FeCl2. 4H2O 0.4 MnCl2. 4H2O 0.1 CoCl2. 6H2O 0.12 AlK (SO4)2 0.01 ZnCl2 0.1 NaCl 1.0 CaCl2 0.02 Na2MoO4 0.01 H3BO3 0.01 配制水 无氧蒸馏水 # N(CH3COOH)3先溶于碱。避光保存 复合维生素浓缩液（配方见表3）。 表3 复合维生素浓缩液成分（mg/100ml） 药品 加量 药品 加量 生物素（Bioton） 2.0 盐酸吡哆醇(PyripoxinHCl,VB6) 10 硫胺素(ThiamineHCl,VB1) 5.0 D-泛酸钙(D-Calcuin Pantothenate) 5.0 硫辛酸(Thiocticacid) 5.0 叶酸(Folic acid) 2.0 烟酸(Nicotinicacid ,VB2) 5.0 VB12 0.1 核黄素（Riboflavin ,VB3） 5.0 对氨基苯甲酸(P-aminobenzic acid) 5.0 配制水 无氧蒸馏水 # 存于冰箱，避光保存。 培养基的制备：采用煮沸除氧 根据需要按表1比例逐一加入除Na2S、NaHCO3和半胱氨酸盐外的试剂，调PH为7.0左右，把培养基装入锥形瓶中，划一刻度，另加适量蒸馏水（1L培养基约加200ml蒸馏水），煮沸至原刻度； 通入无氧N2去除气相中的空气；停止加热10分钟左右加入半胱氨酸盐，注意继续通入无氧N210分钟，此时培养基颜色由兰紫色逐渐褪成浅粉色；在厌氧箱内或高纯N2保护下在厌氧箱外分装培养基。为便于10倍系列稀释，每只测试瓶9ml培养基，为避免漏气，用新的异丁橡胶塞塞紧后加压铝盖。 灭菌 将培养基、1% Na2S和10% NaHCO3的溶液、2ml注射器、针头等物品在0.1MPa（121℃）下灭菌20~30分钟。 测试方法 调试好厌氧箱并将所需无菌用品移入厌氧箱；对灭菌后的测试瓶进行编号，根据不同样品来源估计菌数，确定最高稀释度；每管培养基用无菌注射器加入0.2ml1% Na2S和0.1ml10% NaHCO3。用经无氧氮气置换的灭菌注射器从预处理后的样品中抽取1.0ml样品做10倍系列稀释接种，并通入H2/CO2 为80:20的混合气。每一组均应留一不接种的空白作对照。 测试瓶的稀释接种见附录A：测试瓶法测细菌总数 培养方法 产甲烷菌在培养箱内恒温倒置培养，一般温度为平均油藏温度和35℃，如果有特殊需要可视具体情况而定。 阳性管的检出 阳性管，即有待测菌生长的稀释管。培养2~3周后，用气相色谱测定各稀释管中甲烷的含量，以判定产甲烷菌是否生长，检出阳性管。 菌浓的计算 菌浓的计算方法见附录B。 厌氧发酵菌的分析 培养基的成分： 表4 厌氧发酵菌培养基 药品 加量（g） 药品 加量（g） NH4Cl 1.0 K2HPO4 0.1 NaCl 0.8 MgSO4 0.2 KCl 0.1 CaCl2 0.02 CaCO3 0.2 微量元素10倍浓缩液 0.9ml 蛋白胨 5.0 复合维生素10倍浓缩液 0.5ml 酵母膏 2.5 葡萄糖 10 PH 7.0 # 适用温度为 90 ℃ 实验步骤： 1） 培养基的制备 按表4配制培养基，再用1NNaOH或HCl调PH。 发酵菌培养基应先煮沸除氧：在培养基中加适量蒸馏水（1L培养基约加200m蒸馏