人smyd3基因启动子荧光素酶报告载体的构建与分析-中国药科大学.pdfVIP

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２００９，４０（２）：１７３－１７７ １７３ 人ＳＭＹＤ３基因启动子荧光素酶报告载体的构建与分析 谢景航，邹佳宁，唐　聪，杨家森，罗学刚，奚　涛 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘　要　目的：克隆５′长度不同的ＳＭＹＤ３基因启动子序列并进行活性鉴定。方法：采用ＰＣＲ方法克隆出ＳＭＹＤ３基因 转录起始位点上游不同长度的基因片段，构建Ｔ载体并利用酶切与测序进行鉴定；将该基因亚克隆至ｐＧＬ３Ｂａｓｉｃ荧光报告 基因载体上；瞬时转染Ｈｅｐ３Ｂ细胞后用双荧光报告检测系统检测不同片段的荧光活性。结果：Ｔ载体酶切与测序结果正 确，成功构建了ｐＧＬ３Ｂａｓｉｃ＋３７０～１４００ｂｐ荧光报告载体并利用双荧光素酶报告基因检测系统分析了重组质粒的荧光活 性。结论：ｐＧＬ３Ｂａｓｉｃ＋３７０～１４００ｂｐ重组质粒转染组与阳性对照组相比并未表现出显著的荧光活性，本研究认为ＳＭＹＤ３ 基因的启动子核心区域位于－１３３４ｂｐ的上游。 关键词　ＳＭＹＤ３；荧光素酶；报告载体；启动子 中图分类号　Ｒ７３５７　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２００９）０２－０１７３－０５ ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｖｅｃｔｏｒｓｏｆｈｕｍａｎＳＭＹＤ３ ｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｒ  ＸＩＥＪｉｎｇｈａｎｇ牞ＺＯＵＪｉａｎｉｎｇ牞ＴＡＮＧＣｏｎｇ牞ＹＡＮＧＪｉａｓｅｎ牞ＬＵＯＸｕｅｇａｎｇ牞ＸＩＴａｏ ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｉｍ牶Ｔｏｃｌｏｎｅａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅ５′ｒｅｇｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＳＭＹＤ３ｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｒＭｅｔｈｏｄｓ牶Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒａｇ ｍｅｎｔｓｏｆｔｈｅＳＭＹＤ３ｐｒｏｍｏｔｅｒｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄａｎｄｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏＰＴＧ１９Ｔｖｅｃｔｏｒｓａｎｄｔｈｅｎａｎａｌｙｚｅｄｂｙｅｎｚｙｍｅｄｉ ｇｅｓｔｉｏｎａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｎｇＴｈｅｃｏｒｒｅｃｔｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅｌａｔｅｒｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｐＧＬ３Ｂａｓｉｃｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｖｅｃ ｔｏｒｓＴｒａｎｓｉｅｎｔｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｌａｓｍｉｄｓａｎｄβｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｗｉｔｈＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌ ｌｉｎｅＤｕａｌｌｉｇｈｔｒｅｐｏｒｔｅｒａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｌｕｃｉｆｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓＲｅｓｕｌｔｓ牶Ｔｈｅｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｎｇａｎｄｓｅ ｑｕｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｎｇｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＰＴＧ１９ＴｖｅｃｔｏｒｓｗｅｒｅｐｒｏｖｅｄｔｏｂｅｃｏｒｒｅｃｔＴｈｅｐＧＬ３Ｂａｓｉｃ＋３７０１４００ｂｐ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｖｅｃｔｏｒｓｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙｔｈｅｄｕａｌｌｉｇｈｔｓｙｓｔｅｍａｓｓａｙＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ牶ＴｈｅｐＧＬ３ Ｂａｓｉｃ＋３７０１４００ｂｐｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｇｒｏｕｐｓｈａｖｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｕｃｉｆｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓＩｔｉｓｓｐｅｃｕｌａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｃｏｒｅｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅＳＭＹＤ３ｐｒｏｍｏｔｅｒｓｈｏｕｌｄｌｏｃａｔｅｏｎｔｈｅｕｐｓｔｒｅａｍｏｆ－１３３４ｂｐ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ＳＭＹＤ３牷ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ牷ｒｅｐｏｒｔｅｒｖｅｃｔｏｒ牷ｐｒｏｍｏｔｅｒ ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＢａｓｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒａｍｏｆＣｈｉｎａ牗９７３Ｐｒｏｇｒａｍ牘牗ＮｏＧ１９９８０５１１９牘 　　人ＳＥＴ和ＭＹＮＤ结构域含有蛋白３（ＳＥＴａｎｄ 细胞的分化、黏附以及迁移［４－５］。采用小发夹干扰 ＭＹＮＤｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎ