人白细胞介素10受体α基因真核表达及与jak1蛋白的-生物技术通报.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2017, 33 5 :170-175 人白细胞介素 10受体 α基因真核表达及与 JAK1蛋白 的相互作用的检测 郭欣欣  王刚  邓巧亭  吴涵韬  李坤  吴英松  刘天才 （南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所，广州 510515） 摘 要 ： 构建含人白介素10 受体α （ - ）基因的真核表达质粒pENTER-IL-10RA-His，并在HEK293 中进行真核表达， IL 10RA 并用免疫共沉淀检测JAK1 与IL10RA 在细胞内的相互作用。在HeLa 细胞中提取人总RNA，通过RT-PCR 获得人IL10RA 的基因全 长，并将其克隆至真核表达载体pENTER-His 中。经PCR 扩增、双酶切、测序鉴定后，将重组质粒pENTER-IL-10RA-His 转染至 HEK293 细胞中。免疫印迹法检测IL-10RA 蛋白在HEK293 细胞中的表达。结果显示，经PCR 扩增和双酶切，测序鉴定质粒克隆正确。 免疫印迹可见63 kD 的目的蛋白。共同转染JAK1 和IL-10RA 的质粒，免疫印迹可见分别为133 kD 和63 kD 的目的条带，免疫共 沉淀鉴定了JAK1 和IL-10RA 的相互作用。 - 基因成功构建在pENTER-His 中，并在HEK293 细胞中成功表达，并成功共转 IL 10RA 染JAK1 和IL-10RA 质粒，免疫共沉淀检测两者的相互作用。这为JAK1 和IL-10RA 相互作用的机制研究奠定基础。 关键词 ： 白介素10 受体α （IL-10RA）；真核表达 ；免疫共沉淀 ；蛋白相互作用 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016-0985 Eukaryotic Expression of Human Interleukin 10 Receptor α and Detection of Interactions in Protein JAK1s GUO Xin-xin WANG Gang DENG Qiao-ting WU Han-tao LI Kun WU Ying-song LIU Tian-cai （Institute of Antibody Engineering ，School of Laboratory Medicine and Biotechnology ，Southern Medical University ，Guangzhou 510515 ） Abstract: This work is to construct a eukaryotic express vector pENTER-IL-10RA-His that expresses human interleukin 10 receptor α （IL-10RA）in HEK293 cells，and then to detect the intracellular interaction between JAK1 and IL-10RA by co-immunoprecipitation. Human total RNA was extracted from Hela cells，then - gene was amplified by RT-PCR and inserted into eukaryotic vect