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食品中沙门氏菌检测试剂盒说明书 【产品名称】 食品中沙门氏菌检测试剂盒 产品编号：BTA2050 规 格：48次/盒 【产品简介】 本试剂盒的检测原理是通过对食品中细菌的广谱培养、和定时采样，然后采用可以高效结合DNA的离心柱和独特的缓冲液系统提取出样品中细菌的基因组DNA，并通过实时荧光定量PCR分析，从而特异性的检测沙门氏菌。食品中的沙门氏菌经过不同的时间培养活菌数量将不断增加，从而导致特异性PCR的Ct值变小，根据这一原理在不同增菌培养时间取样并检测PCR的Ct值，通过样品PCR的Ct值变化可以判断细菌的活性状态。本试剂盒包括三个部分：1. 广谱细菌培养基用于细菌的增菌培养；2. 高效细菌DNA提取试剂盒；3.沙门氏菌特异荧光染料PCR试剂盒，本试剂盒适用于食品中沙门氏菌的快速检测及其活死菌的分析。 【产品特征】 1. 特异性：可特异性检测沙门氏菌； 2. 快速：最快可在24-32小时内完成检测； 3. 高通量：可最多同时进行96个样品的检测； 4. 特点：可用于死菌和活菌的分析。 【产品内容】 产品组成 规格 广谱培养基（BTA2001） 4.05gx48袋 溶菌酶 200mg 溶菌酶重悬液LYB 11mL 清洗液WB1 11mL 清洗液WB2 8.25mL 裂解液BLB 10.5mL 洗脱液EB 10.5mL 蛋白酶K 1mL 吸附柱 50个 收集管 50个 2×PCR mix 500μL 引物 50μL 蒸馏水 500μL 阳性对照品 50μL 阴性对照品 50μL 【储存条件及有效期】 试剂盒中溶菌酶、蛋白酶K、2×PCR mix、引物、阳性对照品必须置于-20oC储存，其余试剂常温储存。 试剂盒中试剂有效期均为1年时间。 【注意事项】 请务必在使用此试剂盒之前阅读此注意事项。 避免反复冻融。 所有离心使用台式离心机，低温下离心。 溶菌酶的配制：将溶菌酶干粉溶解在溶菌酶重悬液LYB中，配制成20mg/mL的溶菌酶溶液，现配现用。 清洗液WB1和清洗液WB2在使用前务必检查是否加入无水乙醇。 5、 本试剂盒检测灵敏度高，为防止污染，应按PCR检测要求，分区进行操作：反应液配制区、样本处理区、反应检测区。 【操作步骤】 增菌培养 1.1 取一包培养基，加入225mL蒸馏水于500mL锥形瓶中，高压灭菌（121oC、15min）备用。 1.2 称取25g（mL）样品放入盛有225mL增菌培养基的无菌均质杯或锥形瓶中，以 8 000 r/min～10 000 r/min 均质 1 min～2 min或漩涡振荡1 min～2 min，或置于盛有225 mL增菌培养基的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀即可。如使用均质袋，可直接进行培养，于 36 oC±1 oC培养 18h。如为速冻产品，应在 45 oC以下不超过 15 min，或 2 oC～5 oC不超过 18 h 解冻。 1.3 在0h（培养前）进行第一次取样，即将样品的稀释液混匀后从中取1mL到1.5mL无菌离心管中，10000rpm离心5分钟，尽量吸去上清液，放入4oC冰箱保存备用（该样品暂时不进行DNA提取）；在增菌培养的18h进行第二次取样（此样品直接进行DNA提取和PCR测定，得到Ct值为Ct2），即将样品增菌液摇匀后从中取1mL到1.5mL无菌离心管中，放入4oC冰箱保存备用。同时将剩余的增菌液置于4oC冰箱保存备用。 DNA提取 使用前请先将清洗液WB1和清洗液WB2中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上标签，加入后混匀并在“[ ]”中打钩。使用1ml溶菌酶重悬液LYB重悬20mg溶菌酶。 2.1 将所取细菌增菌液10000rpm离心5分钟，尽量吸去上清液，收集细菌。 2.2 向收集得到的细菌沉淀中加入180μL20mg/mL的溶菌酶溶液，振荡至菌体彻底悬浮，37oC孵育样品20分钟，期间漩涡混匀1-2次。 2.3 向样品中加入20μL蛋白酶K和200μL的裂解液BLB并漩涡混匀， 56oC孵育样品20分钟，期间漩涡混匀2-3次。 2.4 取出样品降温至常温后加入200μL无水乙醇，混合均匀。 2.5 将上一步得到的混合物（包括沉淀）转入吸附柱中（吸附柱放入2ml收集管中），10000rpm离心1分钟，弃去收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 2.6 向吸附柱中加入500μL清洗液WB1（使用前请先检查该试剂是否已按照说明加入无水乙醇），10000rpm离心1分钟，弃去收集管中废液，将吸附柱放回收集管中。 2.7 向吸附柱中加入500μL清洗液WB2（使用前请先检查该试剂是否已按照说明加入无水乙醇），10000rpm