高灵敏度焦磷酸测序平台的建立及应用研究-中国药科大学学报！.pdfVIP

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１１，４２（６）：４８１－４８９ ４８１ ·药学前沿· 高灵敏度焦磷酸测序平台的建立及应用研究 １，２ １，２ ３，４ 宋沁馨 ，刘云龙 ，周国华 １ ２ （中国药科大学药物分析教研室，南京２１０００９；中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室， ３ ４ 南京２１０００９；南京军区南京总医院药理科，南京２１０００２；华东医学生物技术研究所，南京２１０００２） 摘　要　焦测序技术是一种基于生物发光法测定焦磷酸盐的测序技术，在进行ＤＮＡ序列分析时不需要电泳和荧光标 记，定量性能好，结果准确，可实现自动化。但其应用过程中存在３个技术瓶颈：一是测序试剂灵敏度低、成本高；二是测定 仪器价格昂贵；三是测序模板制备过程繁琐。本课题组针对这些技术瓶颈，提出了一整套解决方案，包括高灵敏度焦测序 反应试剂的研制、小型便携式焦测序仪的研制、测序模板的制备方法研究等。建立的高灵敏度微型化焦测序平台在分子诊 断的各个领域得到了充分的应用，如细菌病毒转基因成分等的序列测定、单核苷酸多态性测定、拷贝数变异测定、基因突变 位点测定、ｍｉｃｒｏＲＮＡ测定、基因表达量测定和药物基因组学研究，具有测序灵敏度高、仪器体积小、成本低、操作简便快速 等优点，应用前景广阔。本文详细介绍了本课题组在提高焦磷酸测序反应灵敏度、简化测序过程、改进测序仪器和拓展焦 磷酸测序应用范畴所做的系列创新性工作。 关键词　焦磷酸测序；分子诊断；测序模板的制备；高灵敏度焦测序反应试剂；药物基因组学 中图分类号　Ｒ９６８　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１１）０６－０４８１－０９ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｐｌａｔｆｏｒｍｓ １牞２ １牞２ ３牞４ ＳＯＮＧＱｉｎｘｉｎ 牞ＬＩＵＹｕｎｌｏｎｇ 牞ＺＨＯＵＧｕｏｈｕａ １ ２ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牷ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤｒｕｇＱｕａｌｉｔｙＣｏｎｔｒｏｌ ３ ａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｖｉｇｉｌａｎｃｅ牗ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牘牞ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牷ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ牞 ４ ＪｉｎｌｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００２牷ＨｕａｄｏｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｉｃｓ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００２牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＰｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｉｓａｒｅａｌｔｉｍｅＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｂａｓｅｄｏｎｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ牗ＰＰｉ牘ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈｏｕｔｔｈｅｎｅｅｄｏｆｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｌａｂｅｌｉｎｇＩｔｉｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｈｉｇｈｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｅｒｆｏｒｍ ａｎｃｅ牞ａｃｃｕｒａｔｅａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｅａｓｙａｕｔｏｍａｔｉｏｎＴｈｅｂｏｔｔｌｅｎｅｃｋｓｉｎｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｃ