大豆根部两株产植酸酶菌的分离鉴定及中性植酸酶基因的克隆.pdfVIP

※生物工程 食品科学 2013, Vol.34, No.11 163 大豆根部两株产植酸酶菌的分离鉴定及 中性植酸酶基因的克隆 姚明泽，卢文亮，张耀华，梁爱华* ( 山西大学生物技术研究所，化学生物学与分子工程教育部重点实验室，山西 太原 030006) 摘  要：从大豆根部土壤中筛选到两株产植酸酶的细菌菌株，对其进行形态学分析和16S rRNA鉴定，确定两个菌 株为枯草芽孢杆菌，并对其植酸酶的酶学性质进行初步研究。通过PCR方法从该芽孢杆菌基因组中克隆了植酸酶 phy ycD phy ycE 基因 ( )和 ( ) 。与NCBI 已报道的植酸酶序列分别通过BLASTn和BLASTp程序进行比对，确定phy(ycD)和 β phy(ycE)属于 -螺旋桨植酸酶家族。两个植酸酶核酸序列同源性达到98%。两个基因的开放阅读框(ORF)均为1149个 核苷酸，编码382个氨基酸。N端26个氨基酸为信号肽序列，整个酶分子有5个氨基酸不同，运用SWI SS-MODEL服 务器进行同源建模，使用Spdbv软件对其三维结构评估，这5个氨基酸中的4个分别处在酶分子不同二级结构部位。 β phy ycD phy ycE -螺旋桨植酸酶基因 ( )和 ( ) 的获得，为进一步探讨中性植酸酶的结构与功能以及该类植酸酶的产业化 应用提供实验数据。 关键词：植酸酶基因；克隆；酶学性质；芽孢杆菌 Isolation and Identification of Two Phytase-producing Strains from Soybean Rhizosphere Soil and Cloning of Neutral Phytase Gene * YAO Ming-ze ，LU Wen-liang，ZHANG Yao-hua，LIANG Ai-hua (Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering, Ministry of Education, Institute of Biotechnology, Shanxi University, Taiyuan 030006, China) Abstract ：Two strains capable of enhanced phytase production were isolated from soybean rhizosphere soil. According to morphological observation and 16S rRNA sequence analysis, both were identified as Bacillus subtilis . From both phy ycD phy ycE stains, phytase-encoding genes, ( ) and ( ), were cloned by polymerase chain reaction. Sequence analysis was conducted with BLASTn and BLASTp programs, available on the National Center for Biotechnology Information database