小麦glu2d3和glu2b3位点lmw2gs基因特异引物设计与pcr扩增.pdfVIP

第 30 卷 第 2 期 作 　物 　学 　报 Vol. 30 , No. 2 2004 年 2 月 　126～130 页 ACTA AGRONOMICA SINICA pp. 126～130 　Feb. , 2004 小麦 GluD3 和 GluB3 位点 LMWGS 基因特异引物设计与 PCR 扩增 1 1 2 1 1 1 1 赵惠贤 　郭蔼光 　胡胜武 　范三红 　张大鹏 　任思霖 　王瑞娟 ( 1 西北农林科技大学生命科学院 ,农业分子生物学重点实验室 ,陕西杨凌712100 ;2 西北农林科技大学农学院 ,陕西杨凌712100) 摘 　要 　用 CTAB 法提取小麦基因组 DNA ,根据 GenBank 中公布的已知 LMWGS 基因序列 ,设计并合成染色体位点特异 PCR 引物 1～7 ;利用特殊小麦材料 ———六倍体普通小麦阿勃二体、1A 、1B 和 1D 缺体 ,四倍体小麦及二倍体的一粒小麦和 节节麦的基因组 DNA 为模板 ,在优化的 PCR 体系下进行特异性扩增和引物验证。结果表明 : 引物 3 和引物 4 为小麦谷 蛋白 GluD3 位点 LMWGS 基因特异 PCR 引物 ,用其进行扩增时 ,循环反应条件为 :94 ℃变性 1 min , 62 ℃退火 1 min ,72 ℃ 延伸 2 min 。扩增产物大小约 1. 60 kb ,包括了启动子和完整编码区。引物 5 和 7 为小麦谷蛋白 GluB 3 位点 LMWGS 基因 特异 PCR 引物 ,用其进行扩增时 ,循环条件为 :94 ℃变性 1 min ,64 ℃退火 1 min ,72 ℃延伸2 min 。扩增产物大小约 1. 45 kb 左右 ,包括了启动子和完整编码区。此外 ,用引物 3 和 4 通过 PCR 技术克隆到小偃 6 号小麦 GluD3 位点 LMWGS 基因 (登录号为 AY263369) ;该基因编码的 LMWGS 含 9 个 Cys 残基。这是首次发现含 9 个 Cys 残基的 LMWGS 基因。它可能 是小偃 6 号加工品质优良的主要原因之一。 关键词 　普通小麦 ;特异染色体位点 ;低分子量麦谷蛋白基因 ;PCR 中图分类号:S512 Development of Primers Specific for LMWGS Genes at GluD3 and GluB3 Loci and PCR Amplification 1 1 2 1 1 1 1 ZHAO HuiXian , GUO AiGuang , HU ShengWu , FAN SanHong , ZHANG DaPeng ,REN SiLin , WANG RuiJuan (1 Key Lab of Agricultural Molecule Biology , College of Life Sciences , Northwester SciTech , University of Agriculture and Forestry , Yangling 712100 , Shaanxi ; 2 College of Agronomy , Northwester SciTech , University of Agriculture and Forestry , Yangling 712100 , Shaanxi , China) Abstract 　The genomic DNA was extracted from whea