体细胞核移植技术生产转基因猪胚胎的研究-华南农业大学学报.pdfVIP

第３４卷 第３期 华南农业大学学报 Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．３ 　　　　　　　　　　 　　 　　　　　　　　 ２０１３年７月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｊｕｌ．２０１３ 体细胞核移植技术生产转基因猪胚胎的研究 １ １ １ ２ １ 华再东 ，刘西梅 ，毕延震 ，华　升 ，郑新民 （１湖北省农业科学院，动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北 武汉４３００６４； ２武汉金鹰牧业有限公司，湖北 武汉４３０２０９） 摘要：以转染绿色荧光蛋白基因的猪胎儿成纤维阳性细胞作为体细胞核移植的核供体，体外成熟卵母细胞为核移 植受体构建绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎，研究供核细胞的处理、注核部位及重构胚融合／激活时间对转ＧＦＰ克 隆胚早期发育的影响．结果显示，胎儿成纤维细胞血清饥饿与非饥饿培养１０ｄ处理组，采用卵周间隙核移植重构胚 的卵裂率（８２３５％和７９０７％）差异不显著（Ｐ＞００５）；体外培养４２～４４ｈ卵母细胞进行胞质内和卵周间隙注核的 重构胚胎，其卵裂率（８１１１％和７６８０％）差异不显著（Ｐ＞００５）；将卵周间隙注射法构建重构胚在０～１ｈ，２～４ｈ 和６～８ｈ进行融合／激活操作，前２组重构胚卵裂率（７５６１％和８３０７％）无显著差异（Ｐ＞００５），但显著高于第３ 组（６０００％）的卵裂率（Ｐ＜００５）． 关键词：供核细胞；融合激活时间；转基因重构胚；猪 中图分类号：Ｓ８６４．３　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１３）０３０３９４０５ ＡＳｔｕｄｙｏｆＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＰｉｇＥｍｂｒｙｏｓＰｒｏｄｕｃｅｄｂｙＳｏｍａｔｉｃ ＣｅｌｌＮｕｃｌｅａｒＴｒａｎｓｆｅｒ １ １ １ ２ １ ＨＵＡＺａｉｄｏｎｇ，ＬＩＵＸｉｍｅｉ，ＢＩＹａｎｚｈｅｎ，ＨＵＡＳｈｅｎｇ，ＺＨＥＮＧＸｉｎｍｉｎ （１ＨｕｂｅｉＫｅｙＬａｂｏｆＡｎｉｍａｌＥｍｂｒｙｏＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＨｕｂｅｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅ， Ｗｕｈａｎ４３００６４，Ｃｈｉｎａ；２ＷｕｈａｎＪｉｎｙｉｎｇＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｗｕｈａｎ４３０２０９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｕｄｙ，ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＦＰ）ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｅｍｂｒｙｏｓｗｅｒｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙ ｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｆｅｒｏｆＧＦＰｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｓｉｎｔｏｅｎｕｃｌｅａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏｍａｔｕｒｅｄｏｏｃｙｔｅｓ．Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｒｅｃｏｎ ｓｔｒｕｃｔｅｄｅｍｂｒｙｏｓｂｏｔｈｉｎｖｉｔｒｏｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ，ａｎｄＧＦＰｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｃｈｅｃｋｅｄａｓｗｅｌｌ．Ｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｆｅｒａｎｄｆｕｓｉｏｎ／ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｎ ｅａｒｌｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｖｉｔｒｏｏｆｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｅｍｂｒｙｏｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｔｈｅｃｌｅａｖａｇｅｒａｔｅｓｂｅｔｗｅｅｎｓｅｒｕｍｈｕｎｇｅｒａｎｄｎｏｔ