植酸酶转基因猪成纤维细胞系的构建-畜牧兽医学报.PDFVIP

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１３４４１ ７１４ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 植酸酶转基因猪成纤维细胞系的构建 ， １２ ２ ３ ２ １ 陈晓亮 ，黄 怡 ，殷丽丽 ，王士长 ，林秀坤 　 （ 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 ； １． １００１９３ 广西大学动物科技学院，南宁 ； 中国农业大学农学与生物技术学院，北京 ） ２． ５３０００４ ３． １００１９３ 摘 要：本研究旨在获得对胃蛋白酶和胰蛋白酶具有耐受性的植酸酶转基因猪成纤维细胞系。本研究首先检测了 　 转植酸酶基因的酵母发酵液分别经不同浓度、Ｈ２．０的胃蛋白酶和不同浓度、Ｈ７．０的胰蛋白酶处理后的酶活残 ｐ ｐ 余量；然后采用流式细胞术筛选了慢病毒转染的阳性猪成纤维细胞，并进行鉴定。结果表明，酵母粗酶液经胃蛋白 酶和胰蛋白酶处理后，残留酶活分别保持在 和 以上；包装后的慢病毒滴度为 ７，经流式细胞术筛 ７０％ ８０％ ３．７５×１０ 选的转基因细胞阳性率为 ， 和 结果表明，植酸酶基因已整合到基因组上，且该基因在转录水平 １．２％ ＰＣＲ ＲＴＰＣＲ 上表达。本研究为制备植酸酶转基因细胞系提供了一种快速有效的方法，为转基因猪的培育奠定了基础。 关键词：转基因；植酸酶；慢病毒；流式细胞分选；猪成纤维细胞 中图分类号： ； 文献标志码： 文章编号： （ ） Ｓ８２８Ｓ８１３．３ Ａ ０３６６６９６４２０１３０１０００７０８ 　　　　 　　　　 犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋狅犳犪犖犲狑犜 犲犘犺狋犪狊犲犜狉犪狀狊犲狀犻犮犛狑犻狀犲犉犻犫狉狅犫犾犪狊狋犆犲犾犾犔犻狀犲 狔狆 狔 犵 ， １２ ２ ３ ２ １ ， ， ， ， ＣＨＥＮＸｉａｏｌｉａｎ ＨＵＡＮＧＹｉＹＩＮＬｉｌｉＷＡＮＧＳｈｉｃｈａｎ ＬＩＮＸｉｕｋｕｎ ｇ ｇ （ ， ， ， ； １．犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅 犃狀犻犿犪犾犛犮犻犲狀犮犲 犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿 狅 犃 狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊犅犲犻犻狀 １００１９３犆犺犻狀犪 犳 狔 犳 犵 犼 犵 ， ， ， ；