基于马尾松反转录转座子序列的irap分子标记开发及应用.pdfVIP

林业科学研究　２０１６，２９（３）：３４８ ３５３ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　文章编号：１００１１４９８（２０１６）０３０３４８０６ 基于马尾松反转录转座子序列的ＩＲＡＰ分子 标记开发及应用 １，２ ２ ２ ３ １ 崔博文 ，范付华 ，丁贵杰 ，杨章旗 ，文晓鹏 （１．贵州大学农业生物工程研究院生命科学院 山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室， 贵州 贵阳　５５００２５；２．贵州大学贵州省森林资源与环境研究中心，贵州 贵阳　５５００２５；３．广西林科院，广西 南宁　５３００００） 摘要：［目的］为了丰富马尾松遗传信息，开发更多适用于马尾松的新型分子标记。［方法］依据马尾松Ｔｙ１ｃｏｐｉａ类 型和Ｔｙ３ｇｙｐｓｙ类型反转录转座子ＲＴ序列的保守区域设计引物，建立了马尾松ＩＲＡＰＰＣＲ技术体系并以１２个基因 型个体为材料进行验证。［结果］４２条引物中筛选出多态性丰富、重复性好的２９条进行ＰＣＲ扩增，共获得２２７条谱 带，其中多态性条带２０７个，多态性比例为９１．１９％，平均观测等位基因数（Ｎａ）为１．９１１９±０．２８４１，有效等位基因 数（Ｎｅ）为１．４６８０±０．２８８２，Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指数（Ｈ）为０．２９１１±０．１４４９，Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ信息指数（Ｉ）为０．４４７２± ０．１９５３；利用引物Ｐ１２、Ｐ１５或Ｒ１，可以将栽培种与无性系两类区分开；Ｐ２可作为核心引物，能将 １２份供试材料 有效区分开来；采用ＩＲＡＰ标记构建了供试种质的ＤＮＡ指纹图谱；供试种质的遗传相似系数为０．４６ ０．６９，以相似 系数为基础，进行ＵＰＧＭＡ聚类分析，以０．５７为阈值可将供试种质分为三类，其中无性系内不同材料间也存在较大 的遗传变异。［结论］ＩＲＡＰ分子标记能有效地用于马尾松种质的鉴别与亲缘关系分析等相关研究。 关键词：反转录转座子；ＩＲＡＰ标记；马尾松；指纹图谱；多态性 中图分类号：Ｓ７９１２４８ 文献标识码：Ａ ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＩＲＡＰＭａｒｋｅｒｓＢａｓｅｄｏｎＧｅｎｏｍｉｃＬＴＲＲｅｔｒｏｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｉｎＭａｓｓｏｎＰｉｎｅ（Ｐｉｎｕｓｍａｓｓｏｎｉａｎａ） １，２ ２ ２ ３ １ ＣＵＩＢｏｗｅｎ ，ＦＡＮＦｕｈｕａ，ＤＩＮＧＧｕｉｊｉｅ，ＹＡＮＧＺｈａｎｇｑｉ，ＷＥＮＸｉａｏｐｅｎｇ （１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔＲｅｓｏｕｒｃｅＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄＧｅｒｍｐｌａｓｍＩｎｎｏｖａｔｉｏｎｉｎＭｏｕｎｔａｉｎｏｕｓＲｅｇｉｏｎ（ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ），Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ ＡｇｒｏｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＧｕｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５００２５，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｆｏｒＦｏｒｅｓｔ ＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｏｆＧｕｉｚｈｏｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＧｕｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５００２５，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；３．ＧｕａｎｇｘｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ， Ｎａｎｎｉｎｇ　５３００００，Ｇｕａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＴｏｄｅｖｅｌｏｐｎｅｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒＰｉｎｕｓｍａｓｓｏｎｉａｎａ．［Ｍｅｔｈｏｄ］Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｒｅｇｉｏｎｏｆＲＴ（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＴｙ１ｃｏｐｉａａｎｄＴｙ３ｇｙｐｓｙｔｙｐｅｒｅｔｒｏｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ，ｔｈｅ ＩＲＡＰＰＣＲｓｙｓｔｅｍｆｏｒＰ．ｍａｓｓｏｎｉａｎａｗａ