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吉林农业大学学报 2010 ,32 (3) :258～263 ,283 http :/ / x uebao. j lau . edu . cn
J ournal of J ilin A gricultural University Email :j lndxb @vip . sina . com
大蒜蒜氨酸酶基因克隆与序列分析及毕赤酵母
表达质粒的构建
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吴晓莉 , 许 健 , 张 婷 , 贾 平 , 周云凯
1. 浙江中医药大学生命科学学院 , 杭州 310053 ; 2 . 浙江省人民医院 , 杭州 310014
( )
摘 要 : 根据 GenBank 登录的蒜氨酸酶序列 S73324 设计上下游引物 ,利用 RT - PCR 技术从浙江大蒜鳞茎中
扩增蒜氨酸酶基因 ,获得了长度为 1 523 bp 的cDNA 序列 ,提交 GenBank (登录号 : FJ 786257 ,命名为浙江蒜氨酸
)
酶 。利用生物信息学相关软件对该序列进行同源性比较 、进化分析 、蛋白质的结构和酶活性中心预测 , 引用
p PICZaC 载体构建蒜氨酸酶毕赤酵母真核表达重组质粒 。结果表明:浙江蒜氨酸酶与其他葱属植物如大蒜 、
洋葱 、冬葱 、火葱和细香葱蒜氨酸酶具有高度同源性 ,进化关系比较接近 , 目的基因可以成功构建到毕赤酵母
表达载体 。浙江蒜氨酸酶三维结构呈树枝状 ,蛋白质分子的N 端含有一个类似表皮生长因子结构域 ,酶的中
心含一个天冬氨酸氨基转移酶超家族结构域 ; 蛋白质结构中Lys277 可能是磷酸吡哆醛的结合位点 ,Lys277
周围区域可能是酶活性中心部位 。重组质粒经鉴定构建正确 。
关键词 : 蒜氨酸酶 ; 大蒜 ; 克隆; 序列分析 ; 毕赤酵母
( )
中图分类号 : Q78 文献标识码 : A 文章编号 : 2010
Cloning and Sequence Analysis of Alliinase Gene from Garlic and Con
struction of Pichia pastoris Expression Plasmid
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WU Xiaoli , XU J ian , ZHAN G Ting , J IA Ping , ZHOU Yunkai
1. College of L fi e Science , Zhej iang Chinese Medical University , Hangz hou 310053 , China ; 2. Zhej iang
Provincial Peop le ′s Hosp ital , Hangz hou 310014 , China
Ab stract : Primers were designed based on the reported sequences of alliinase ( S73324) in GenBank . The
cDNA gene encoding alliinase protein was extracted from
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