大豆锌指转录因子gmdi19-5对高温的响应及互作蛋白-中国农业科学.pdfVIP

中国农业科学 2017,50(12):2389-2398 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.12.019 大豆锌指转录因子GmDi19-5对高温的响应及互作蛋白的筛选 1,2 2 2 2 2 2 2 1 赵娟莹 ，刘佳明 ，冯志娟 ，陈明 ，周永斌 ，陈隽 ，徐兆师 ，郭长虹 1 2 （哈尔滨师范大学生命科学与技术学院/黑龙江省分子细胞遗传与遗传育种重点实验室，哈尔滨 150025 ； 中国农业科学院作物科学研究所/ 国家农 作物基因资源与基因改良重大科学工程/农业部麦类生物学与遗传育种重点实验室，北京 100081 ） 摘要： 【目的】高温胁迫已经成为威胁作物生长发育的主要非生物胁迫因素之一，转录因子在植物非生物 胁迫响应中起着重要作用。通过对大豆锌指转录因子基因 GmDi19-5 在高温胁迫下的响应和功能鉴定，以及利用 酵母双杂交技术从大豆 cDNA 文库筛选与其互作的候选蛋白，研究 GmDi19-5 对高温胁迫的响应机制。【方法】 以大豆 cDNA 为模板，利用实时荧光定量 PCR 检测 GmDi19-5 在高温处理不同时间段的表达模式；通过 PlantCARE 和 PLACE 数据库预测 GmDi19-5 启动子元件，并对 GmDi19-5 启动子转基因拟南芥在高温处理下进行的组织化学 染色，分析 GmDi19-5 启动子在高温胁迫下的活性；构建 pGBKT7-GmDi19-5 诱饵载体，验证自激活活性；利用酵 母双杂交技术，以 pGBKT7-GmDi19-5 为诱饵筛选大豆 cDNA 文库，筛选与其互作的候选蛋白；进一步用酵母双杂 交系统验证 GmDi19-5 与候选蛋白的互作；利用实时荧光定量 PCR 检测候选蛋白基因在对高温处理的响应情况； 构建融合表达载体，用 GFP-GmDi19-5 融合表达载体转化拟南芥原生质体，检测 GmDi19-5 蛋白的亚细胞定位情 况。【结果】实时荧光定量 PCR 结果显示，GmDi19-5 在高温胁迫下上调表达；启动子元件分析表明，GmDi19-5 包含多种与胁迫应答相关的顺式作用元件，包括热响应元件 HSE；组织化学染色分析发现，经高温处理后，过 表达拟南芥幼苗的地上部分和地下部分均有报告基因的表达；亚细胞定位结果表明，GmDi19-5 蛋白定位于拟南 芥原生质体的细胞核中；通过酵母双杂交技术筛选到了与 GmDi19-5 互作的候选蛋白，试验进一步验证了 GmDi19-5 与 GmDnaJ 在酵母细胞中互作；另外，实时荧光定量 PCR 结果显示，互作蛋白基因 GmDnaJ 受高温胁迫 诱导表达。【结论】GmDi19-5 受高温诱导表达，GmDi19-5 可能与 GmDnaJ 互作，表明 GmDi19-5 功能的发挥可能 需要 GmDnaJ 的参与。 关键词：大豆；锌指转录因子；高温；酵母双杂交；蛋白互作 The Response to Heat and Screening of the Interacting Proteins of Zinc Finger Protein GmDi19-5 in Soybean 1,2 2 2 2 2 ZHAO JuanYing , LIU JiaMing , FENG ZhiJuan , CHEN Ming , ZHOU YongBin , 2