wt1定量联合FCM在急性髓细胞白血病MRD监测中的临床应用.pdfVIP

· 392 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Mar；52(3) 网络 出版 时间 ：2017—3—1318：10 网络 出版地址 ：http：／／kns．cnki．net／kcms／detail／34．1065．R1810．038．html wtl定量联合FCM在急性髓细胞白血病MRD监测中的临床应用 郝英婵，徐修才 摘要 目韵 探讨在急性髓细胞 自血病 (AML)中Witms瘤 的AML患者MRD监测的有效途径 。 基因1(wt1)mRNA定量联合多参数流式细胞术(FCM)分析 1 材料与方法 监测微小残留病灶的临床应用。方法 采用实时荧光定量 聚合酶链反应技术 (qST．PCR)检测 35例 AML患者的wtl 1．1 病例资料 收集2014年9月 ～2015年9月初 表达水平 ；将患者根据不同亚型分组检测；并且对9例缓解 发AML患者35例，男 19例，女 16例，17～74岁，中 和4例复发患者进行随访，检测 wtl表达水平。采用 FCM 位年龄54岁，其中M02例，Ml5例，M210例，M4 分析 AML中微小残留病灶(MRD)水平。结果 与对照组 7例，M59例，M62例；治疗后期完全缓解组9例， 比较，AML病例组wtl表达水平明显增高 ，差异有统计学意 复发5例。所有患者经血常规、骨髓象等检查，并结 义 (PO．05)。在初诊的各种AML亚型中，M2亚型wtl表 达水平最高，M6亚型wtl表达水平最低。9例随访患者提 合免疫表型和核型分析，符合国内现行 白血病分型 示在达到完全缓解时wtl表达水平下降，而4例随访复发患 标准 j。另收集诊断为缺铁性贫血、过敏性紫癜、 者在复发时再次升高。FCM检测 MRD在不同阶段异常髓 免疫性血小板减少性紫癜、巨幼细胞性贫血共 22例 系细胞比例明显不同。联合qRT-PCR和 FCM技术对MRD 的骨髓作为正常对照组，并确定骨髓中wtl转录本 检测韵敏感性和特异性大大提高，两者具有一致性；利用 的正常参考水平。随访时间1～36个月，中位随访 ROC曲线对复发病例进行分析得到的监测阈值为3．33％。 时间24个月。所有患者在初诊时同时通过多重 结论 在急性髓细胞白血病中wtlmRNA定量联合多参数 PCR方法筛检常见融合基因_3J，复发病例同时收集 流式细胞术分析可用于监测 MRD、评估治疗效果、预后及预 同时期的细胞形态学结果进行比较。试验中涉及到 测疾病复发风险。 的内容均经医院医学伦理学委员会批准，并且与患 关键词 Witms瘤基因1；急性髓细胞白血病；实时荧光定量 者签署知情同意书。 聚合酶链反应；多参数流式细胞术；微小残留病灶 1．2 荧光定量PCR检测wtl转录水平 中固分类号 R446．11 1．2．1 单个核细胞分离和总RNA的提取 采集新 文献标志码 A 文章编号 t(tO0—1492(2017)03-0392—05 鲜骨髓 0．5～1ml，EDTA抗凝后，用Ficoll淋 巴细胞 doi：tO．19405／j．cnki．issnlO00—1492．0217．03．019 分离液分离出单个核细胞，用 TRIzol提取试剂盒