靶向沉默动脉粥样硬化患者巨噬细胞中Notch基因对NF-κB经典通路的影响.pdfVIP

中华细胞与干细胞杂志(电子版)2016年 12月第6卷第6期 ChinJCellStemCell(ElectronicEdition)，Dec2016，Vo1．6，No．6 ·327· · 论著 靶 向沉默动脉粥样硬化患者巨噬细胞中 Notch基因对NF—KB经典通路的影响 李伟 朱莉 阮中宝 任 寅 王斌 【摘要】 目的 探讨Notch和NF．r,B信号通路在动脉粥样硬化(AS)发病过程中的作用 方式、两者是否存在串话。方法 将AS患者外周血单核细胞诱导为巨噬细胞后，分别经Notchl— siRNA、Notch2一siRNA、Notch3一siRNA 以及NC．siRNA转染。使用RT-PCR和WesternBlot法检 测转染后各组P65、I~cBa基因以及蛋 白表达情况。EMSA法检测转染后各组NF．r．B活性。免 疫荧光法检测巨噬细胞内P65分布。两组间资料差异比较采用t检验，多组问比较采用单因素 方差分析。结果 RT-PCR结果显示，siRNA转染巨噬细胞后，Notch3一siRNA组、Notch2．siRNA 组、NotchI．siRNA组中P65基因表达水平渐次降低 (分别为 0．709±0．007、0．557±0．031、0．114± 0．014)，组间差异有统计学意义 (F=709．224，PO．001)，且较空白及阴性对照组均出现明显下 降(P0．05)，Noch1．siRNA组下降最显著；而 Ir．Ba表达水平渐次升高(分别为 1．811±0．172、 3．253±0．169、5．295±0．433)，组间差异有统计学意义 (F=112．290，PO．001)，并均明显高于空 白、阴性对照组(P0．05)，也以Noch1．siRNA组变化最明显。Western—Blot方法检测所得P65、 Ir,Ba蛋 白表达 结果与RT-PCR结果一致。Notch．siRNA转染后的巨噬细胞 内NF—KB活性均 显著低于空 白对照组和阴性对照组，Notchl—siRNA组活性下降最显著。巨噬细胞核 内及胞浆 内P65蛋 白的荧光强度Notch1．siRNA组(21405．20±929．91)、Notch2-siRNA组(25987．13± 911．40)、Notch3．siRNA组 (28074．67±452．16)较空 白对照组(57238．33±1059．21)以及阴性 对照组(55844．27±1331．10)均不同程度减弱 (P均 0．01)，且细胞核 内荧光强度较核外更低， 以Notch1．siRNA组减弱最明显(组间比较F=55．137，P0．001)。结论 AS患者巨噬细胞中 Notch与NF—KB经典通路之间存在正向调节，且Notch1通路较Notch2、Notch3对NF—KB经典 通路的调节作用更显著。 【关键词】 Notch； NF—KB； 基因表达； 动脉粥样硬化； 巨噬细胞 EffectsofsilencingNotch geneson NF-KB classicpathwayinmaerophagesofpatientswith atherosclerosisLiWei,ZhuLi,RuanZhongbao，Renlqn，WangBin．DepartmentofCardiology, TaizhouPeoplesHospital,Taizhou225300,China Correspondingauthor．ZhuLi,Email．tzheart@126．com 【Abstract] Objective Toinvestigatethemechanism andcrosstalkbetweenNotchand NF—KBsignalingpathwayinmacrophagesofpatientswithatherosclerosis(AS)．Methods The mononuclearcellsfrom peripheralbloodofpatientswithASwereinducedintomacrophages，which werethensilencedbyNotch1一siRNA，Notch2-siRNA，Notch3·siRNA andNC—siRNA．RT-PCR and W esternblotwereappliedtoassesstheexpressionlevelsof