苦荞锌指蛋白基因ftlol1的克隆及其对非生物胁迫的应答.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（８）：４４５０ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 苦荞锌指蛋白基因ＦｔＬＯＬ１的克隆及其对 非生物胁迫的应答  高　飞　周　婧　刘晓彤　李成磊　姚慧鹏　赵海霞 　吴　琦 （四川农业大学生命科学院　雅安　６２５０１４） 摘要　根据苦荞（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍｔａｔａｒｉｃｕｍ）花期转录组数据，采用ＲＴＰＣＲ技术和ＰＣＲ技术克隆得到 一个Ｃ２Ｃ２型锌指蛋白基因ＦｔＬＯＬ１（ＦｔＬＳＤｏｎｅｌｉｋｅ１，ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＰ２６０６６２），获得 ｃＤＮＡ和 ＤＮＡ全长序列，采用实时荧光定量ＰＣＲ技术研究ＦｔＬＯＬ１在３种非生物处理条件下的表达模式。 结果显示，苦荞ＦｔＬＯＬ１基因ＤＮＡ全长１７２０ｂｐ，由５个外显子和４个内含子组成，符合ＧＴＡＧ剪 切原则；ｃＤＮＡ包含一个４４４ｂｐ的开放阅读框，编码 １４７个氨基酸，具有ＬＳＤ１家族的典型特征； ２ｍｍｏｌ／Ｌ水杨酸、ＵＶＢ照射和４℃冷处理均能导致ＦｔＬＯＬ１基因表达量下降，其中水杨酸和ＵＶＢ 处理均在１２ｈ达到最小值，分别为对照组（０ｈ）的１１．９％和３３．８％，而４℃冷处理条件下，ＦｔＬＯＬ１ 表达量１２ｈ开始下降，至２４ｈ达到最小值，为对照组（０ｈ）的５０．７％，３６ｈ后表达量有所回升，稳定 在对照组（０ｈ）的６０％左右。推测该基因可能参与苦荞抗高浓度水杨酸、ＵＶＢ照射和冷胁迫等非 生物胁迫的应答反应，为探究苦荞抗逆性提供了新的视角。 关键词　苦荞　锌指蛋白　基因克隆　非生物胁迫　表达 中图分类号　Ｑ７８９ 　　锌指蛋白是植物中最为丰富的一类转录因子之 化酶（ＣｕＺｎＳＯＤ）来清除由病原菌或者其它非生物胁 一，对植物的生长发育、抗病及抗非生物胁迫具有重要 迫造成的过量积累的活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ， ［１２］ ［５］ 的调控作用 。根据锌指蛋白结构域半胱氨酸（Ｃ）和 ＲＯＳ），减轻氧迸发的二次伤害 。Ｅｐｐｌｅ等在拟南芥 组氨酸（Ｈ）残基的数目和位置，可将含锌指结构域的 基因组上鉴定出２个类ＬＳＤ１基因ＡｔＬＯＬ１和ＡｔＬＯＬ２， 转录因子分为Ｃ２Ｈ２，Ｃ２Ｃ２，Ｃ３Ｈ，Ｃ３ＨＣ４（ＩＵＮＧｆｉｎｇｅｒ） 研究结果表明ＡｔＬＳＤ１和ＡｔＬＯＬ１通过拮抗作用调节 和Ｃ３ＨＣ５（ＬＩＭｆｉｎｇｅｒ）５个亚类。其中，Ｃ２Ｃ２型锌指蛋 ＣｕＺｎＳＯＤ的积累来决定细胞的命运。随后在水稻、小 ＋ 麦、玉米等植物中发现并克隆出更多含有 ｚｆＬＳＤ１结构 白的４个半胱氨酸残基与Ｚｎ以配位键相结合，形成稳 ［６７］ 定的锌指结构，参与 ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质的识别、调控 域的基因 。功能研究表明，这类 ＬＳＤ１型锌指蛋白 ［３］ 在细胞过敏性死亡、植物广谱抗病性以及植物对低温、 基因转录，并参与蛋白质之间的相互作用 。 ［８］ 　　类ＬＳＤ１基因编码一类特殊的Ｃ２Ｃ２型锌指蛋白， 长日照等非生物环境胁迫具有调控功能 。 含 有 ３ 个 特 殊 的 锌 指 结 构 域： 　　苦荞是一种药食两用的小杂粮作物，富含黄酮类 ［４］ 化合物，对人类多种疾病具有预防治疗作用，被开发成 ＣｘｘＣｘＲｘｘＬＭＹｘｘＧＡｘＳＶｘＣｘｘＣ，又称为ｚｆＬＳＤ