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药物研发利器之高通量筛选技术 高通量筛选(High throughput screening，HTS)技术是指以分子水平和细胞水 平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试 验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机分析处理实验数据， 在同一时间检测数以千万的样品，并以得到的相应数据库支持运转的技术体系， 它具有微量、快速、灵敏和准确等特点。 高通量筛选技术是20 世纪80 年代后期发展起来的一种药物筛选新技术，是 新药发现技术和方法的一大进步。传统的药物筛选方法是采用药理学的实验方法， 通过体内、体外的多种实验方法，评价药用样品的药理活性。但是，由于传统的 药理实验方法需要消耗大量样品，使用大量实验动物，参加实验的技术人员具有 较熟练的操作技能，而且筛选样品量有限，劳动强度大，不能适应大量样品的同 时筛选。高通量药物筛选是在传统的筛选技术基础上，应用先进的分子生物学、 细胞生物学、计算机、自动化控制等高新技术，建立的一套更适合于药物筛选的 技术体系。 英国学者AlanD 研究提示，一个实验室采用传统的方法，借助20 余种药物 作用靶位，1 年内仅能筛选75000 个样品；1997 年高通量筛选技术发展初期，采 用 100 余种靶位，每年可筛选 100 万个样品；1999 年高通量筛选技术进一步完 善后，每天的筛选量就高达10 万种化合物。 由于药物高通量筛选要求同时处理大量样品，实验体系必须微量化，而这些 微量化的实验方法应根据新的科研成果来建立。 根据其生物学特点，可分为以下几类： 1、 受体结合分析法； 2 、 酶活性测定法； 3、 细胞分子测定法； 4 、 细胞活性测定法； 5、 代谢物质测定法； 6、 基因产物测定法。 这些实验方法，均已广泛用于药物高通量筛选中。 常用的筛选模型都在分子水平和细胞水平，观察的是药物与分子靶点的相互 作用，能够直接认识药物的基本作用机制。 分子水平的药物筛选模型： 1、 受体筛选模型 指受体与放射性配体结合模型。以受体为作用靶的筛选方法,包括检测功能 反应、第二信使生成和标记配体与受体相互作用等不同类型。 2 、 酶筛选模型 观察药物对酶活性的影响。 根据酶的特点,酶的反应底物，产物都可以作为检测指标，并由此确定反应速 度。典型的酶筛选包括： A 、 适当缓冲液中孵化； B 、 控制反应速度，如：温度、缓冲液的pH 值和酶的浓度等； C、 单时间点数器，需测量产物的增加和底物的减少； 3、 离子通道筛选模型 细胞水平药物筛选模型： 1、 采用2D 细胞培养，观察被筛样品对细胞的作用，传统检测方法反映 药物对细胞生长等过程的综合作用。如内皮细胞激活、细胞凋亡、抗肿瘤活性、 转录调控检测、信号转导通路。 2 、 通过3D 细胞培养进行药物筛选，相对于传统的2D 培养，更充分考 虑到肿瘤体内的微环境和细胞之间的相互作用，模拟体内环境，以减少体内外实 验的差异，此外三维肿瘤球聚体与动物移植实体瘤相比，具有重复性强、实验周 期短、成本小等优点。 3、 通过分子生物学手段，针对不同靶点构建的细胞筛选模型也能反映 药物作用的具体途径和靶标，如针对GPCR 受体构建的各种细胞系。 我国进行药物高通量筛选的优势首先是化合物来源广泛，且多为天然；其次 是对化合物生物活性的筛选目的较明确，无目的合成的化合物较少；第三我国传 统药物为筛选研究提供了一个巨大的资源库，可从中药中提取分离筛选新的化合 物。这些优势为药物的高通量筛选打下了坚实基础。 王晶等以药用真菌桑黄为研究对象，应用甲醇为溶剂提取其有效成分，进一 步采用微孔读板法评价桑黄提取物的抗氧化活性。王莉等构建人源胱硫醚β合酶 CBS△516 -525 体外高通量筛选模型，在基础酶活水平，筛选天然产物库，发现 新型、高效且特异的CBS 天然产物抑制剂。姜玉环等采用荧光偏振高通量筛选 的方法进行 PLK1 PBD 小分子抑制剂的筛选，筛选出一个有望成为靶向 PLK1 PBD 的抗肿瘤先导化合物。杨秀颖等则另辟蹊径采用肿瘤细胞联合正常成纤维 细胞筛选评价中草药提取物特异性抗肿瘤作用，成功发现该方法有利于发现高效、 低毒抗肿瘤中草药提取物。 药物筛选模型是发现新药的重要手