非结构蛋白1抗原捕获酶联免疫吸附法评价登革-中华预防医学杂志.pdfVIP

．论著 非结构蛋白1抗原捕获酶联免疫吸附法 评价登革病毒抗体中和活性 温坤丁彦青丘立文潘玉先蔡建飘岳彩峰狄飚车小燕 virus 【摘要】 目的在获得具有中和活性的针对I型登革病毒(dengueserotypeI，DENV．1)的 抗体基础上，评价已建立的非结构蛋白l(nonstmctural protein1，NSI)抗原捕获酶联免疫吸附法 immunoaorbent (enzyme-linkedassay，ELISA)分析抗体中和活性的町行性，为中和抗体的筛选和疫苗效 果的评价提供一个更为快速、简便的检测方法。方法 使用重组DENV．1包膜蛋白Ⅲ区(envelope proteindomainⅢ，EDm)免疫5只BALB／e小鼠制备单克隆抗体(简称单抗)，采用间接EL[SA、间接 免疫荧光法(immunofluorescence assay，IFA)和免疫印迹法(WesternBlot)对单抗进行筛选及鉴定；同 时用该重组蛋白免疫1只新西兰兔，制备多克隆抗体血清；以传统噬斑减少中和试验(plaque reductionneutralization test，PRINT)作为参比方法，采用NSI抗原捕获ELISA对所获抗体进行中和活 性检测。结果 获得4株针对DENV-l EDⅢ单抗和I份兔多抗血清，且被PRNT试验证明均具有中 和活性，四株单抗腹水(1Al、lB3、3D3、9I)6)和兔多抗血清中和效价分别为1：1024、l：512、l：256、 l：4096和l：4096。使用NSI抗原捕获ELISA法检测不到PRNT中和效价最低的3D3抗体对DENV一1 有中和能力，而检测其余3株单抗(1A1、183、91)6)和多抗兔血清中和效价均远低于PRNT测定结 果，分别为l：32、I：32、1：128和1：128。结论 简单、快速的NSl抗原捕获ELISA可用于评价DENV 抗体的中和活性，该方法适合于高效价中和抗体的筛选，有望成为评价疫苗效果的方法之一。 【关键词】 登革热病毒；病毒包膜蛋白质类； 酶联免疫吸附测定；病毒非结构蛋白质类； 中和试验 Toevaluatethe abililiesof virusantibodieswith 1 nonstructural neutralizing anti-dengue protein immunosorbentWEN onzyme-linked n-en．PAN antigencapture assay Kun‘，DINGYan·qing，QlU 地一xian，cA，Jian-piao，眦Cai-feng，DIBiao，CHEXiao—yatt‘ClinicalLaboratory，劢咖昭Hospital， SouthernMedical University．C,uangzJIou510282．China To antibodies Objecttve domainⅢ 【Abstract】 produceneutralifing ag且i珊tenvelopeprotein virus evaluatethenonstructural (EDU1)ofdengueserotypeI(DENV-1)and proteinl(N