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荧光假单胞菌对食用菌生长促进作用探究 　　摘要 研究荧光假单胞菌对食用菌生长的促进作用，结果表明：不同菌液对不同种食用菌香菇、平菇、鸡腿菇、白灵菇、双孢蘑菇、杏鲍菇的促生效果不同。在平菇、杏鲍菇、双孢蘑菇、鸡腿菇丝生长的共培养试验中，荧光假单胞菌的促进作用明显，以平菇最为显著。白灵菇菌丝生长的共培养试验中，没有观察到明显的促进作用。然而在香菇菌丝生长的共培养试验中发现显著的抑制作用。平菇出菇试验结果表明，添加菌液的菇袋，菌丝满袋时间较不添加菌液的对照提前5～8 d。原基分化、子实体形成也提前约1周的时间，同时出菇产量提高11.9%。 关键词 食用菌；荧光假单胞菌；16S rDNA鉴定；促生长作用 中图分类号 S646 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）02-0071-04 食用菌由于其独特的风味、丰富的营养和特殊的疗效，其鲜品和各种深加工产品符合人们的消费理念和生活追求，已经成为老百姓“菜篮子”的重要组成部分。以食用菌为主导的白色农业产业正成为新型效益农业的生力军。改造传统食用菌运作方式，发展现代设施化农业，形成具有区域特色的产业链，为农业增效、农民增收及农业现代化提供了强有力的技术支撑。目前，国内食用菌栽培料多经过巴氏杀菌、堆积发酵处理或采用生料[1]。在食用菌生长发育的不同时期，栽培料中微生物组成成分、种类及数量均随之变动[2-3]，在子实体形成时期荧光假单胞菌[4-5]数量达到峰值。研究结果表明，微生物的数量及组成对食用菌菌丝生长速度和子实体分化起着十分重要的作用[6-8]。 Kim et al报道过Pseudomonas sp.P7014对杏鲍菇菌丝生长及早期子实体形成的过程中所起的诱导作用[9]，并分别对其菌体和代谢物在促进菌丝生长方面的作用进行了研究，目的是利用此特点使杏鲍菇的产量提高，最终在商业领域开发和利用。鉴于此，该文利用此特点分离筛选产荧光的假单胞菌菌株，并将初步筛选到的菌株与平菇菌丝共培养，两者的共培养采取PDA平板共培养和在装有棉籽壳的试管里共培养的方法，初步研究其对平菇菌丝生长的影响，筛选出对平菇菌丝生长起促进作用的菌株，从而有效缩短平菇的生产周期，为进一步研究提高平菇产量积累了材料。同时，通过此次试验可以逐步考虑将平菇菌丝生长的促生菌制成微生物活菌制剂，有助于将来在商业领域的开发及其利用。 1 材料与方法 1.1 试验材料 郑州市平菇菌袋12个样：①长满菌丝并出菇；②菌袋一半长菌丝一半没长菌丝；③长满菌丝但未出菇；④菌袋两头长有少量菌丝。郑州市郊区不同的小麦和油菜地里取根际土，共18个土样。郑州市郊区双孢菇土样16个样：①长满菌丝的稻草；②覆土后接近菌丝的土样；③未长满菌丝的稻草；④覆土后接近菌丝的土样。安徽文昌西扎村桃源取根际土样共14个样。共取样60个，所有材料的采集采用无菌操作，采集后分别放入无菌袋，4 ℃冷藏保存。 1.2 试验方法 1.2.1 产荧光菌株的初筛及纯化分离。对于前12个样分别取菌袋的表面和深层培养料少许放入含90 mL无菌水的三角瓶中，置摇床振荡15～20 min，使微生物细胞分散，静置20～30 s，即成10-1的悬液。对后面几个土样则按土壤稀释液的制备方法称取10 g进行稀释。 采用平板稀释法[10]将所取材料用无菌水以10倍梯度稀释成10-4～10-1 稀释液，取10-4～10-1稀释液各0.2 mL涂MS平板（或King′s B培养基），28 ℃培养 48 h，检查分离结果，挑取单个菌落并划线分离，纯化培养，直至用显微镜涂片染色检查为单一微生物为止，同时将初筛到的菌进行相应编号并保存，平菇菌袋里筛选到的菌编号为（1～25），小麦和油菜地里筛选到的菌编号为（a～y），双孢菇培养料里筛选到的菌编号为（A～T），西扎村桃源取根际土样筛选到的菌编号为（26），将所筛选到的菌做简单鉴定，观察菌落形态、颜色、菌落大小及产荧光色素的情况。挑取366 nm波长紫外光下发绿色荧光的菌落纯化培养并保存。 1.2.2 荧光假单胞菌生理生化特性鉴定试验[11-12]。一是筛选试验复筛优选出促进生长作用显著的3种菌株。平板及试管待筛细菌与平菇菌丝共培养试验。平菇菌种的活化[1]所筛选菌株与平菇菌丝共培养采取以下2种方式：① PDA平板试验。取初筛分离纯化后保存的菌株转管活化于28 ℃恒温箱中培养24 h，然后接入装有100 mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的500 mL三角瓶中，置于28 ℃、220 r/mim摇床振荡培养24 h，得到培养好的饱和细菌菌液。按无菌操作要求将菌液分别用无菌水稀释到10-1和10-2后，各吸取0.2 mL对号接入已写好稀释度的PDA平板中，每个号码设3个重复，用无菌玻璃涂棒涂布均匀涂