许SLE的开题报告.ppt

实验目的 通过MRL/lpr狼疮鼠模型，进一步了解凉血化瘀方药对系统性红斑狼疮的疗效，治疗机制及毒副作用 寻找与瘀热相关的实验室指标. 实验小鼠及分组 购置MRL/lpr种鼠36只，均雌性。由上海史克莱公司从美国Jackson实验室引种。根据随机数字表随机分为中药组9只，西药组7只，中西医结合组7只，模型组7只。阴性组6只。 实验药物 Ⅰ.中药基本方：水牛角15g、制大黄6g、赤芍10g、紫草10g、生地15g、玄参12g等共12味中药，中药煎剂来自南京中医药大学第一临床医学院科研中心。每毫升含生药0.73g。 Ⅱ. 西药: 强的松 C T X 实验方法 ①实验动物造模后,观察各组小鼠每日的生命体征变化. ②各组小鼠12周龄时开始灌药。中药根据每只老鼠的体重计算给药剂量，平均0.6ml/d。1次/日。疗程为50天。 西药予相当于成人剂量强的松0.5mg/KG/d,CTX10mg/Kg/d腹腔注射连用两天。模型组每日灌生理盐水0.6ml,阴性组不灌药。 用药前检测24小时尿蛋白定量（以后每3周查一次）。灌药50天后，查尿常规，大便常规， 24小时尿蛋白定量,眼眶取血，并做肝肾功能,血沉, 及ANA, 抗ds—DNA及IL-1，IL-6，TNF-ａ，抗C1q抗体及PDGF检查。处死小鼠，取肾脏及血管作病理检查并取肾组织做免疫荧光检查（IgG、IgA、IgM）。 小鼠与人用药量换算：动物与人体的每公斤体重剂量折算系数表示20g小鼠是60kg成人的9.01倍。 标本采集及检验 血标本 病理标本 血标本采集及检验 摘眼球取血。血液静置1小时后，3000转/分离心6分钟。取血清。血清ANA ,抗ds—DNA, TNF-α，IL-1，IL-6,抗C1q抗体水平及PDGF的检测,采用小鼠检测EL ISA 试剂盒,检测步骤按说明书进行。 病理标本采集及检查 病理检查：将小鼠脱臼处死,迅速取出肾脏,固定于10%的甲醛溶液中。对肾脏石蜡切块进行常规HE 染色和Masson 特殊染色,观察不同组别肾脏的病理改变。参照2003年ISN /RPS的LN病理分型标准对光镜所见肾脏病变的活动性及慢性化程度依Austin肾脏病理评分表标准计算半定量积分。 免疫荧光病理方法：肾组织经OCT包埋后,采用低温冰冻切片,切片厚为4μm ,用4 ℃丙酮固定10 min ,PBS 洗3 次,滴加异硫氰荧光素标记的兔抗人IgG、IgA、IgM等荧光抗体 ,置于37 ℃孵育30 min , PBS 洗3次,甘油封片,置于4 ℃冰箱内待检。由专人在荧光显微镜下观察IgG、IgA 、IgM，C3等荧光抗体在肾脏中沉积的部位和特点,并根据荧光强度进行半定量分析。 ⑤统计处理： SPSS14.0统计软件 计量资料用均数加减标准差（x±s）两组间计量资料比较采用t检验，计数资料采用X2检验，等级资料用Ridit分析。 预期结果 比较中药组或中西药组与模型组及单用西药组在狼疮鼠体重下降,蛋白尿，尿常规,ESR,肾功能,抗C1q抗体及肾脏与血管病理等方面指标的差别,显示本方剂对狼疮的治疗作用。根据大便常规，尿常规，肝功能等了解本方毒副作用。观察抗C1q抗体及PDGF等的变化以初步了解本方部分作用机制。 通过对中药组及模型组各指标的统计分析，治疗后有明显差别的指标初步考虑与“瘀热”相关。 课题研究进度和具体安排 2009．1～2009.5 收集古典医籍及现代论著，学术论文。对文献资料进行研究分析，完成理论研总结。 2009.05—2009.09 完成凉血化瘀方对MRL/lpr狼疮鼠疗效机制及瘀热相关实验室指标的研究 2009.10—2010.04 整理数据，统计分析并总结实验结果，撰写学位论文 2010.05—2010.06 准备论文答辩 谢 谢！ 凉血化瘀方治疗系统性红斑狼疮的实验研究 导 师：金实教授 汪悦教授 研究生：许 文 亚 一　课题的研究背景 二　课题研究的目的及主要内容 三　完成课题的条件及预期结果 四 课题研究的进度和具体安排 课题的研究背景 SLE是以全身免疫异常而致多器官受累为特征的疾