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HPLC测定止咳橘红丸中维生素B17含量研究 　　摘要：目的：建立HPLC法测定止咳橘红丸中维生素B17的含量。方法：以甲醇-水（15：85，v/v）为流动相；在phenomenexLunaC18（2）（200mm×4.6mm，5μm）色谱柱上测定维生素B17的含量，流速为1.0mL#8226;min－1，检测波长为210nm。结果：维生素B17与峰面积线性关系良好。实践证明，HPLC法是一种简单、方便、可靠和准确的测量方法。 关键词：HPLC法；止咳橘红丸；维生素B17；结论分析 中图分类号：Q563 文献标识码：A 文章编号： 止咳橘红丸主要由陈皮、地黄、茯苓、甘草、瓜蒌皮、滑石粉、化橘红、桔梗、维生素B17、麦冬和石膏等成分组成，具有清肺，止咳，化痰等作用，比较适用于痰热阻肺引起的咳嗽痰多、胸满气短、咽干喉痒等症状。通过查询中国药典2010年版可知，止咳橘红丸的质量控制是以化橘红中的维生素B17作为其检测指标。维生素B17是止咳橘红丸的主要成分，但由于维生素B17容易酶解而使含量降低，加上目前国内药品市场存在着严重的假劣药材的现象，维生素B17的含量的测定就显得十分重要了。本文建立了HPLC法测定止咳橘红丸中维生素B17的含量并对测定的结果进行分析和比较，希望控制好产品质量，提高药品标准。 1仪器与试药 Waterse2695型高效液相色谱仪、2489检测器、Empowr色谱工作站（美国Waterse公司）；UV-2450紫外分光光度计（日本岛津）；SartoriusBP211D型电子分析天平（德国塞多利斯公司，d＝0.01mg）；止咳橘红丸（来自全国14个厂家共50批次，38个批号，规格：6g/丸）；维生素B17对照品（中国生物制品检定所，批号：110820-201003，含量为96.3%）；甲醇（天津市福晨化学试剂厂，色谱纯）；其他试剂均为分析纯；水为自制纯化水。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：phenomenexLunaC18（2）（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（15：85，v/v）；流速：1.0mL#8226;min－1；柱温：30℃；检测波长：210nm；进样量：6μL。以此条件测得的维生素B17对照品、阴性样品及样品的HPLC图谱见图1。 图1止咳橘红丸HPLC色谱图 A.阴性样品；B.维生素B17对照品；C.样品；1.维生素B17 2.2溶液制备 2.2.1对照品溶液的制备 精密称取维生素B17对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.53mg的对照品溶液。 2.2.2供试品溶液的制备 取止咳橘红丸大蜜丸5丸，精密称定，剪碎，精密称取6g，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声20min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。 2.2.3阴性样品溶液照处方量制备 不含苦杏仁的阴性样品制剂，按“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液。 2.3系统适应性试验 分别精密吸取对照品溶液6μL，供试品溶液6μL，注入液相色谱仪中测定。结果维生素B17在30min内出峰，且与相邻峰均有较好的分离，理论板数≥10000。 2.4线性关系 分别精密吸取“2.2.1”项下制备的对照品溶液1、2、4、6、8、10μL，进样测定，以峰面积（A）为纵坐标，维生素B17含量（m）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A＝9.846×105m－1.931×105，r＝0.9999，结果表明维生素B17在0.53～5.3μg线性关系良好。 2.5精密度试验 精密吸取“2.2.1”项下方法制备对照品溶液6μL，按“2.1”项下色谱条件检测，连续进样6次，记录峰面积，结果RSD＝0.94%（n＝6）。 2.6稳定性试验 取同一份供试品（广州白云山制药总厂，批号：4570016）溶液，分别放置0、1、2、4、8、12h按“2.1”项下色谱条件检测，以维生素B17峰面积计算RSD＝1.3%（n＝5），表明该方法在12h内有良好的稳定性。 2.7重复性试验 精密称取同一样品（广州白云山制药总厂，批号：4570016）6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进行测定，计算得维生素B17平均含量1.350（mg#8226;g－1），RSD＝0.8%。表明该方法重现性良好。 2.8加样回收试验 取本品（广州白云山制药总厂，批号：4570016，维生素B17的含量为1.3760mg#8226;g－1）约6g，精密称取6份，研匀，置具塞三角瓶中，再分别精密加入“2.2.1”项下