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红枫湖水域水生菌类初步调查和鉴定 　　摘要：应用形态学和分子生物学相关理论知识和方法，对贵阳市红枫湖6个典型地区水体中菌类群落进行了分离培养，共获得387个菌株，其中真菌173株，分属3个亚门9个属；细菌214株，分属7个科8个属。真菌中的半知菌亚门（Deuteromycotina）链格孢属（Alternaria）、曲霉属（Aspergillus）、青霉属（Penicillium）和担子菌亚门（Basidiomycotina）耙齿菌属（Irpex）出现频率较高，为真菌菌株分离总数的70%。细菌中的芽孢菌科（Bacilliacaea）枯草芽孢杆菌属（Bacillus）和假单胞杆菌科（Pseudomonaceae）假单胞杆菌属（Pseudomonas）出现频率较高，为细菌菌株分离总数的50%。菌株数量的变化与温度呈正相关；不同地区的菌株数量与其污染程度有一定的关系。 关键词：水生菌类；分离；鉴定；红枫湖 中图分类号：Q938.8 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）15-3518-03 微生物的种类和含量作为污水指示的重要标志已被列入水质监测项目中。目前，水生菌类的研究已成为真菌研究的热点之一，水生菌类与其生活水体温度、季节、地理、污染和着生基质关系的研究逐步展开[1，2]。红枫湖位于贵阳市平坝县境内，与百花湖、阿哈水库并称为“两湖一库”，是人们生活用水的重要来源之一。 目前，有学者对红枫湖进行了原生动物群落特征、浮游植物以及污染状况等方面的研究，评价其水质，尚未对水体的水生菌类进行研究。试验于2011年3-12月从红枫湖6个典型地带采集水样，对红枫湖水体菌类进行了初步调查和多样性研究。对水中的菌类进行了培养、分离和纯化，旨在为水质的评价提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 样品的采集 1.1.1 采集时间和地点 于2011年3、5-12月在贵阳市红枫湖大坝、腰洞、西郊水厂、花鱼洞、后午、偏山寨6个地点进行取样。 1.1.2 采集方法 将灭菌的塑料瓶在水面下拧开盖子，灌满水后在水中拧上盖子[2]。 1.2 样品的分离 1.2.1 水样中真菌的分离 采用2种方法进行分离培养，分别为：①在无菌操作下，将水样瓶上下倒置几次摇匀，用加样枪取0.2 mL的水加入到PDA和马丁氏培养基上，轻轻移动使水样在培养基上平展开，于培养箱中28 ℃培养。待培养基中长出真菌菌落后，进行分离纯化培养。②在无菌操作下取灭菌的滤纸过滤湖水，然后将滤纸用灭菌的剪刀剪成长为0.5 cm左右的小方块，放在PDA和马丁氏培养基上[1]，于培养箱中28 ℃培养。待培养基中长出真菌菌落后，进行分离纯化培养。 1.2.2 水样中细菌的分离 细菌分离与真菌分离方法基本相同，不同点是所用培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。 1.3 菌类的鉴定 1.3.1 真菌的鉴定 采用形态学和分子生物学2种方法共同鉴定。①将纯化出来的真菌先观察并记录菌落的形状、颜色和生长特点（如同心圆、辐射状等）。然后挑取其孢子制作临时玻片，放在显微镜下观察其孢子的形态特征并拍照记录。再通过查阅相关资料，将形态特征明显的菌类鉴定出来。②采用DNA测序，然后运用blast进行比对，确定到属[3]。 1.3.2 细菌的鉴定 ①将纯化出来的细菌，先观察并记录菌落的形态、生长特点（如光滑、粗糙、皱纹，同心圆等）和透明度等并做好照片记录。②对菌株进行革兰氏染色处理。③采用DNA测序，然后运用blast进行比对，确定到属。 2 结果与分析 2.1 红枫湖水生菌类情况 通过对红枫湖6个地点9个月的水样微生物的调查和鉴定，共获得387个菌株，其中真菌173株，分属3个亚门9个属；细菌214株，分属7个科8个属。 2.1.1 红枫湖真菌种类 1）产孢真菌种类。产孢真菌均属于半知菌亚门（Deuteromycotina），分属6个属，分别为：①炭疽菌属（Colletotrichum）。分生孢子梗无色至褐色，单胞，长椭圆形或新月形。②链格孢属（Alternaria）。分生孢子梗暗色，长短不一，倒棍棒形或椭圆形，有横隔或纵隔。③青霉属（Penicillium）。分生孢子梗从菌丝上垂直生出，为圆形或椭圆形，整体形态为扫帚状。菌落颜色常为绿色，有时会夹杂红色或紫色。④曲霉属（Aspergillus）。分生孢子梗无隔，顶端膨大，呈球形，生出许多小梗，辐射状排列，小梗顶端挂满孢子，串生。分生孢子为圆形或椭圆形。⑤镰刀菌属（Fusarium）。分生孢子镰刀形，少许弯曲，多数为3隔。菌落颜色为白色絮状。⑥枝孢属（Cladosporium）。分生孢子为柠檬形，顶生，孢子梗为暗色，有分枝。具体见图1。 2）不产孢真菌