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两种茶树花粉生活力和贮藏力探究 　　摘要：为开展茶树[Camellia sinensis（L.）O.Kuntze]杂交育种工作，以茶树品种台茶12号（C. sinensis Taicha 12’）和福鼎大白茶（C. sinensis Fuding-dabaicha’）为试材，采用离体培养法开展花粉生活力与贮藏力研究。结果表明，H3BO3、蔗糖、pH、琼脂浓度以及萌发温度对供试的两种茶树花粉离体发芽率均有明显影响。两种茶树花粉离体萌发的最适培养基成分均为300 mg/L Ca（NO3）2+200 mg/L MgSO4+100 mg/L KNO3+100 mg/L H3BO3+10%蔗糖+1.0%琼脂，最适pH 5.4，适宜萌发温度为16～21 ℃。贮藏温度对茶树花粉生活力保持具有显著影响，温度越低越有利于花粉活力的保持。-70 ℃最适于茶树花粉的长期贮藏，贮藏180 d后，台茶12号、福鼎大白茶的花粉发芽率分别为71.12%、50.61%。在生产实践中，-20 ℃贮藏茶树花粉亦可取得较好的效果，贮藏180 d后，台茶12号、福鼎大白茶的花粉发芽率分别为60.16%、46.88%。 关键词：台茶12号（C. sinensis Taicha 12’）；福鼎大白茶（C. sinensis Fuding-dabaicha’）；花粉；离体萌发；生活力；贮藏力 中图分类号：S571.1；Q944.42 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）24-6067-05 茶树[Camellia sinensis （L.）O.Kuntze]是多年生异花授粉的木本植物，因其叶含有多种对人体有益的功能成分，而被作为一种经济作物广泛栽培。生产上茶树多采用无性繁殖以保持其优良性状，却易导致品种退化和病虫害抗性降低[1]。杂交育种是培育茶树新品种的重要途径之一。但茶树为异花授粉的虫媒花植物，且开花期间气温低、昆虫活动少，导致茶树天然结实率较低[2]。在育种实践中，往往由于茶树亲本的花期不遇给杂交育种工作造成很大困难。茶树花粉的生活力与贮藏力研究为解决这些问题提供了一条思路，对茶树杂交育种以及种质资源保存具有一定的理论与实践意义[3，4]。目前，关于茶树花粉生活力和贮藏力的研究报道较少[4-8]。鉴于此，以华中农业大学校内种植的两个茶树品种为试材，开展花粉生活力与贮藏力研究，以期为茶树杂交育种与优良种质保存提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料 以华中农业大学茶园引种栽培的的两个品种为试材。台茶12号（C. sinensis Taicha 12’）：由台湾省茶叶改良场选育，无性系，灌木型，中叶类，中生种[1，2]。福鼎大白茶（C. sinensis Fuding-dabaicha’）：由福建省福鼎市点头镇柏柳村选育，无性系，小乔木型，中叶类，早生种[1，2]。 1.2 方法 1.2.1 花粉采集及贮藏 于2010年12月盛花期间天气晴好的上午，采集生长良好的福鼎大白茶、台茶12号的大蕾期花朵。摊放于白纸上，并置于阴凉通风干燥处放置24 h使花蕾开放、花药开裂。用毛笔轻轻刷下花粉，并置于阴凉通风干燥处，至抖动花粉不结块时收集。取少许新鲜花粉用于筛选适宜萌发的培养基以及检测花粉生活力试验。剩余花粉分别装入离心管中，以脱脂棉封口，置于干燥器中，花粉体积不超过离心管体积的1/3。将干燥器分别置于室温（RT）、4、-20、-70 ℃下避光贮藏。 1.2.2 花粉生活力检测 采用人工离体萌发法检测花粉生活力，具体试验方法及步骤如下。 1）花粉的吸水处理。播种前，取新鲜花粉于4 ℃、暗环境、饱和空气湿度条件下放置2 h，以充分吸水[9]。 2）培养基中各因素对花粉离体萌发的影响。茶树喜酸性土壤，以台茶12号为试材，分别设置琼脂浓度、pH、蔗糖、H3BO3四因素各三个水平，进行正交试验（表1），以初步确定各因素对花粉离体萌发的影响。播种时，用解剖针将充分吸水的花粉均匀播种于培养基，并将培养基置于铺有湿润滤纸的培养皿中，盖上培养皿，于25 ℃暗培养24 h后观察花粉萌发情况[10]。每个培养皿于10×10显微镜下观察，每个视野不少于50粒花粉，记录每个视野的发芽率（萌发花粉数/花粉总数），以花粉管长度大于花粉直径时记为萌发。取6个视野的平均值作为该培养基的花粉发芽率，初步确定花粉离体培养时各因素适宜的水平。 3）两种花粉最适离体萌发培养基的筛选。为了筛选两种花粉最适离体萌发培养基，在上述试验的基础上，设置10种固体培养基，pH 5.4，基本成分为1.0% 琼脂 + 300 mg/L Ca（NO3）2 + 200 mg/L MgSO4 +100 mg/L KNO3，设置3种添加量的蔗糖（5%、