单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体室内质控血清制备和临床应用评价.docVIP

单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体室内质控血清制备和临床应用评价 　　摘要：目的 探讨自制外部弱阳性质控血清在检测血清单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSVⅡ）试剂盒中应用的可行性，并与康润公司质控血清进行结果比对。方法 试验采用对比检测研究，使用美国Trinity Biotech Plc公司提供抗HSVⅡIgG型和IgM型试剂盒分别检测自制和康润公司质控血清 ，采用SPSS16.0进行数据处理。不同月份和不同批号试剂盒间质控血清精密度和稳定性的比较采用均数的t检验，P0.05。自制血清抗HSVⅡIgG型的S/CO值（3.57±0.98），CV值13.78%；康润公司抗HSVⅡIgG型质控血清S/CO值为（3.275±0.822），CV值为12.55%，两种质控血清CV值比较无统计学差异P0.05。结论 自制外部弱阳性质控血清在实际检测中精密度、稳定性符合国家对质控物的要求，基层医院检验科有能力制备，值得推广应用。 关键词：质控血清；单纯疱疹病毒；生殖器疱疹 生殖器疱疹（GH）是皮肤性病科常见的一种由单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSVⅡ）感染引起的性传播疾病，常与生殖道致病微生物如淋球菌，支原体，衣原体，梅毒螺旋体混合感染或其他性病治愈后而发病；此病典型临床表现为生殖器部位的密集水泡，临床诊断相对容易；部分病例由于临床症状不典型或临床医师认识不足常漏诊，因此检测血清HSVⅡ抗体（IgG型和IgM型）可辅助临床确诊此病；尤其是 IgM型抗-HSVⅡ在血清中出现早，上升快，但在血液中存在时间短，可协助临床早期诊断。为了保证检测结果准确性，精密度和可靠性，每次实验均须有内部对照质控血清（阳性及阴性血清）和外部对照质控血清，以外部对照质控血清进行室内质量控制。为了避免商品化质控血清可能存在的基质效应，我们利用检测病例中抗 HSVⅡ阳性标本分别制备了IgG和IgM型弱阳性外部对照质控血清，结果如下。 1 资料与方法 1.1试剂与仪器 ①试剂：抗HSVⅡIgG型和IgM型试剂盒由美国Trinity Biotech Plc公司提供，批号050，有效期2014-11；外部质控血清IgG型和IgM型（4NCU/ml），广州康润生物制品有限公司提供，批有效②仪器：BIO-RAD680酶标仪及ZL-5洗板机。 1.2抗HSVⅡIgG型和IgM型检测采用酶联免疫吸附法（ELISA），按照试剂盒说明书进行操作，以吸光度值/cut-off值（S/CO）判定检测结果，S/CO≥1.1为阳性；S/CO≤0.9为阴性；S/CO值介于0.9～1.1间为检测灰区。 1.3弱阳性外部质控血清制备 我们将皮肤性病门诊确诊为生殖器疱疹病例16例，其中9例为IgG抗体阳性；7例IgM抗体阳性病例再次抽血5ml，并分离血清；同时使用10例健康体检者血清（肝炎标志物，抗HIV，梅毒抗体均阴性并无脂血、溶血、黄疸）；分别将上述血清混匀，经高速离心20min去除蛋白质等沉淀，56℃加热30min备用。用处理后的健康人血清对IgG阳性血清和IgM阳性血清进行倍比稀释，检测吸光度并计算S/CO值。选择阳性质控血清浓度（以吸光度OD值表示）为cut-off值的2～3倍上下的稀释度血清为室内质控血清，过滤除菌并加入0.01%硫柳汞混匀，按50ul用量分装后，-70℃冷冻保存。 1.4室内质控方法 ①绘制质控图：在常规条件下，连续检测抗HSVⅡIgG型和IgM型自制血清20批次，得到20个S/CO值，计算平均值（x）、标准差（s）、变异系数（cv），以S/CO值为纵坐标，以检测批次日期为横坐标，绘制质控图，每次外部对照质控血清的结果（S/CO）依次填入该质控图中；②自制质控血清的精密度和稳定性观察：每次取自制50ul质控血清与标本同时测定抗HSVⅡIgG和IgM；持续检测9个月后统计S/CO的x、SD、CV，并分析各月与第1个月的检测结果的统计学差异；③用三个不同批号试剂盒检测室内质控血清，并持续9个月后统计S/CO的x、SD、CV，并分析本批质控血清用不同批号试剂盒间检测结果的统计学差异。 1.5统计学方法 采用SPSS16.0进行数据处理。不同月份和不同批号试剂盒间质控血清精密度和稳定性的比较采用均数的t检验，P0.05。自制血清抗HSVⅡIgG型的S/CO值（3.57±0.98），CV值13.78%；康润公司抗HSVⅡIgG型质控血清S/CO值为（3.275±0.822），CV值为12.55%，两种质控血清CV值比较无统计学差异P0.05。 2.2自制质控血清精密度和稳定性观察 每月检测自制血清抗HSVⅡIgM、IgG型S/CO值的X、S、CV结果变化分别见表1；康润公司质控血清抗HSVⅡIgM型结果表2。按照室内质控要求，以第