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何首乌不同溶剂提取液体外抑菌活性探究 　　摘要：采用60%丙酮、70%乙醇、沸水3种溶剂制备何首乌（Polygonum multiflorum Thumb）块根粉末提取液，以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、肺炎克氏菌（Klebsiella peneumoniae）、大肠杆菌（Escherichia coli）为供试菌株，通过滤纸片琼脂扩散法测定提取液的抑菌圈大小，以平板二倍稀释法测定最低抑菌浓度（MIC），以试管二倍稀释法测定最低杀菌浓度（MBC）。结果表明，何首乌3种溶剂提取液对供试菌株均有明显的抑制作用，其中60%丙酮提取液和70%乙醇提取液抑菌效果优于沸水提取液，且对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强，丙酮提取液和乙醇提取液的抑菌、杀菌效果随浓度的降低而下降。 关键词：何首乌；抑菌活性；体外测定 中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）18-4390-04 何首乌（Polygonum multiflorum Thumb）为蓼科蓼属植物，其块茎为滋补良药[1]，中医用于治疗肝肾精血亏虚、头昏目眩、须发早白、腰酸遗精、胆固醇过高等[2]。 植物中的萜类、酚类、生物碱类、黄酮类、苷类和醌类等化合物具有杀菌作用[3]。何首乌中含有蒽醌类化合物、二苯乙烯苷类化合物和磷脂类化合物等活性成分，其中二苯乙烯苷可能是主要的活性成分[4]。研究表明何首乌能提高或改善小鼠的记忆能力，减轻钙超载引起的脑损伤，保护神经系统[5，6]；能明显提高小鼠的记忆力，提高脑内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性[7]；何首乌70%乙醇提取液可有效对抗D-半乳糖所致的小鼠亚急性衰老，具有抗衰老作用[8]。试验探讨了何首乌3种不同溶剂提取液对4种常见致病菌的抑菌活性，以期为何首乌的进一步开发利用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 供试植物 何首乌块根，购于临海市临江大药房，经70 ℃烘干后研磨成粉末，贮存于干燥皿中。 1.1.2 供试菌株与培养基 供试菌株为金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、肺炎克氏菌（Klebsiella pneumoniae）、大肠杆菌（Escherichia coli），均由浙江省台州医院惠赠，为临床分离菌株。牛肉膏蛋白胨培养基按文献[9]配制，121 ℃高压灭菌20 min备用。 1.1.3 主要仪器 HVE-50型高压灭菌锅（日本Hirayama Manufacturing公司）；YJ型医用净化工作台（苏州洁净技术研究所）；RE-52CS型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；DNP-9272型电热恒温培养箱（上海精宏实验设备公司），QYC-2102C型全温培养摇床（宁波江南仪器厂）。 1.2 方法 1.2.1 何首乌提取液制备 称取何首乌粉末100 g，分别用60%丙酮、70%乙醇和沸水3种溶剂浸提，反复多次，直至浸出液颜色变淡为止。将浸出液合并浓缩至80 mL，用NaOH调pH至7.0，定容至100 mL，制成浓度为1 000 mg/mL的何首乌提取液，提取液过0.22 μm滤膜除菌，贮存于4 ℃冰箱中。 1.2.2 菌液的制备 菌种接入牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30 ℃活化24 h后取50 μL接入5 mL牛肉膏液体培养基中，30 ℃培养6 h后，取出稀释104、105、106倍，涂牛肉膏蛋白胨平板，30 ℃倒置培养24 h，统计菌落。 1.2.3 抑菌圈的测定 用滤纸片琼脂扩散法测定何首乌不同溶剂提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和肺炎克氏菌的抑菌活性。将直径为6 mm的无菌滤纸片分别置于何首乌乙醇提取液、丙酮提取液和沸水提取液中浸泡20 min。将菌液稀释至106 CFU/mL，取100 μL涂平板，于培养箱内倒置培养15～20 min，待培养基表面干燥后，分别贴上已浸泡过的滤纸片，每处理4个重复，于30 ℃恒温培养24 h，测量抑菌圈直径。以涂布100 U/mL硫酸链霉素溶液为的阳性对照，以涂布无菌水的为阴性对照。 1.2.4 最低抑菌浓度（MIC）的测定 用平板二倍稀释法测定丙酮提取液和乙醇提取液对4种供试菌的抑菌效果。分别配制提取液终浓度为200.0、100.0、50.0、25.0、12.5 mg/mL的牛肉膏蛋白胨平皿固体培养基，每组4个重复。平皿中涂布活化后的菌液（104 CFU/mL）20 μL， 30 ℃倒置培养24 h，进行菌落计数，与对照（无菌水）相比计算抑菌率。以没有供试菌生长的最小浓度为提取液的