低频脉冲磁场对兔膝关节软骨细胞人白介素1β、肿瘤坏死因子α表达及分泌影响.docVIP

低频脉冲磁场对兔膝关节软骨细胞人白介素1β、肿瘤坏死因子α表达及分泌影响[摘要] 目的 探讨低频脉冲磁场对兔膝关节软骨细胞人白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达与分泌的影响。 方法 选择40只健康成年新西兰白兔建立兔膝关节软骨损伤模型，把右膝关节设为治疗组（n = 20），每日给予低频脉冲磁场治疗；左膝关节为对照组（n = 20），给予假磁场治疗，治疗后1、4周深麻醉处死动物，观察相关指标的变化。 结果 在同一观察时间点，IL-1β和TNF-α表达量治疗组均明显少于对照组，差异均有统计学意义（均P 0.05）。治疗组软骨损伤程度较对照组轻微，关节活动度明显大于对照组，outerbridge积分也少于对照组，差异均有统计学意义（均P 0.05）。 结论 低频脉冲磁场治疗骨性关节炎具有简便易行，安全无创等优点，可有效遏制IL-1β、TNF-α的释放，调节分泌作用，从而对骨性关节炎软骨损伤修复具有促进作用。 [关键词] 低频脉冲磁场；兔膝关节软骨细胞；人白介素1β；肿瘤坏死因子α [中图分类号] R683 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）10（b）-0032-03 膝关节骨性关节炎是指由于膝关节软骨变性、骨质增生而引起的一种慢性骨关节疾病，又称为膝关节增生性关节炎、退行性关节炎及骨性关节病等[1]。其发病一般认为可能和年龄、性别、体重、饮食、气候、关节损伤以及过度使用、骨密度、基因突变等因素有关[2]。越来越多的研究证实，其病变是由于机械性外伤或炎症等多种因素造成关节软骨损伤，而使软骨成分产生自身免疫反应，造成继发性的关节软骨破坏。低强度脉冲磁场最早应用于促进骨折的愈合[3]。研究发现，低强度脉冲磁场不仅能够促进骨折愈合，而且可以保证骨折愈合后的效果，但机制尚不明确[4]。本研究旨在通过研究低强度脉冲磁场对骨性关节炎软骨损伤中软骨细胞人白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达与分泌的影响，进一步阐明低强度脉冲磁场促进软骨损伤修复的作用机制，为低强度脉冲磁场临床应用于骨性关节炎等软骨损伤提供理论基础，现报道如下： 1 材料与方法 1.1 实验动物与试剂 实验动物：40只成熟的健康成年新西兰白兔，雌雄均半，体重2.5～3.5 kg，由我院实验动物学部提供。实验主要药品：羊抗兔IL-1β、TNF-α单克隆抗体免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），单克隆抗体IL-1β、TNF-α抗体（RD Systems）。 1.2 动物模型的制备 将新西兰白兔后膝关节局部脱毛，氯丙嗪1 mg/kg肌内注射，氯胺酮5 mg/kg肌内注射全身麻醉。麻醉成功后，仰卧固定于操作台，常规消毒、铺巾。取膝前内侧切口，依次切开皮肤、皮下筋膜组织，暴露膝关节。按改良Hulth模型法切断膝前交叉韧带、内侧副韧带，切除内侧半月板。冲洗关节腔，缝合皮下筋膜和皮肤。术后饲养于实验动物中心，单笼单只饲养，环境温度20～25℃，湿度50%～60%。青霉素20万U/kg肌内注射，每日1次，连续5 d，每日检查石膏固定情况，并及时进行修复。 1.3 动物分组与治疗方法 造模后2周，把右膝关节设为磁场治疗组（n = 20），每日给予低频脉冲磁场治疗，磁场强度30 mW/cm2，频率1.0 MHz，频宽200 μs，重复频率1.0 KHz，每次15 min。左膝关节为对照组（n = 20），给予假磁场治疗（治疗过程同低频脉冲磁场组，磁场治疗仪不开机，探头无能量输出，为假治疗）。 1.4 膝关节活动度评价 处死动物后用量角器测量每只兔子的实验侧膝关节的被动活动度。 1.5 IL-1β和TNF-α表达检测 分别于动物模型制备治疗后1、4周深麻醉处死兔。制软骨细胞匀浆，留取上清后用ELISA试剂盒检测IL-1β、TNF-α含量。 1.6 Outerbridge评分 处死实验动物后大体观察关节液的变化，根据手术显微镜观察所见，采用Outerbridge软骨损伤评分方法进行评分。 1.7 统计学方法 应用SPSS 19.0统计学软件进行数据统计学处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，重复测量的计量资料采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验，以P 0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 两组IL-1β和TNF-α表达变化比较 在同一观察时间点，两组的IL-1β和TNF-α表达量均有差异，治疗组均明显少于对照组，差异均有统计学意义（P 0.05）。见表1。 2.2 两组Outerbridge积分比较 在同一观察时间点，治疗组软骨损伤程度较对照组轻微，Outerbridge积分也少于对照组，差异均有统计学意义（均